1目的类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA),中医临床称之为“痹”症,发病率高,难以治愈,一直受到古今医家的高度关注。中西药制剂较多,但一般均有较强的副作用,且治疗效果亦有待提高。随着科学技术的发展,学者更注重从中医典籍中寻找治疗“痹”症的药物或组方。苍术为芳香化湿药,具燥湿健脾、祛风散寒作用,可用于脘腹胀满、风湿痹痛等。目前关于苍术的研究主要集中于“燥湿健脾”作用上,利用其“燥”性治疗“痹”症的研究少见报道。本研究以苍术为对象,通过体内药效学研究筛选治疗RA的主要药效部位,并对其作用进一步采用动物及细胞模型进行评价,运用气相色谱-质谱联用技术及相关分析方法对苍术治疗RA的代谢途径进行初步预测,为苍术治疗类风湿性关节炎的有效性提供参考依据,为进一步开发药效强、副作用小的抗类风湿关节炎新药奠定基础。2方法2.1苍术治疗RA有效部位的筛选将Wistar大鼠分为7组,分别为正常组、模型组、苍术挥发油高低剂量组、苍术醇提物高低剂量组、阳性药组,除正常组外造AIA(佐剂性关节炎)模型,以行为学变化、足垫厚度变化及关节评分、血清IL-6、IL-17含量为评价指标,筛选苍术治疗RA的主要药效部位。2.2苍术挥发油体内外治疗RA的药效学研究将Wistar大鼠分为5组,分别为正常组、模型组、苍术挥发油高低剂量组、阳性药组,除正常组外其他组造AIA(佐剂性关节炎)模型,以行为学变化、足垫厚度变化及关节评分、血清IL-6、IL-17、TNF-α、IL-1β含量、踝关节HE切片以及免疫组化MMP2、MMP9含量为评价指标,考察苍术挥发油抗RA药效作用。以类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(MH7A)为研究对象进行体外实验,以TNF-α诱导MH7A为模型,给予不同浓度的苍术挥发油,测定细胞毒性及细胞增殖,考察苍术挥发油治疗RA的体外药效作用。2.3基于GC-MS的代谢组学分析苍术挥发油治疗RA的代谢途径采用GC-MS技术对“苍术挥发油治疗RA的药效学研究”中正常组、模型组、苍术挥发油高剂量组大鼠血清成分进行分析,建立血清代谢图谱,运用PCA、PLS、OPLS软件分析,寻找各组之间差异成分,运用Metabo Analyst分析方法,分析差异成分代谢途径,预测苍术挥发油发挥治疗RA作用的可能代谢途径。3结果3.1苍术治疗RA有效部位的筛选大鼠造模后,与正常组相比,其右后足掌均出现明显红肿现象,血清IL-6、IL-17的含量显著升高(P<0.05)。各治疗组大鼠给药后,阳性药组足爪红肿有所改善,血清IL-6、IL-17的含量显著下降(P<0.05);苍术挥发油高、低剂量组大鼠足爪红肿状态改善明显,血清IL-6、IL-17的含量显著下降(P<0.05),而苍术醇提物高、低剂量组大鼠足爪症状无明显改善,血清IL-6、IL-17的含量变化不明显(P>0.05)。3.2苍术挥发油体内外治疗RA的药效学研究大鼠造模后,与正常组相比,其右后足掌均出现明显红肿的现象,血清IL-6、IL-17、TNF-α、IL-1β的含量显著升高(P<0.05)。治疗给药后,阳性药组大鼠足爪有所改善,血清IL-6、IL-17、TNF-α、IL-1β的含量显著下降(P<0.05),苍术挥发油高剂量组大鼠足爪改善显著,血清IL-6、IL-17、TNF-α、IL-1β的含量显著下降(P<0.05),苍术挥发油低剂量组大鼠足爪红肿状态好转,血清TNF-α、IL-1β、TNF-α的含量显著下降(P<0.05);踝关节HE切片结果表明,模型组组织有明显的炎性细胞浸润、新生增生和关节间隙狭窄,苍术挥发油高剂量组给药后显著改善;关节免疫组化结果表明,苍术挥发油高剂量组能抑制AIA大鼠软骨滑膜中MMP2和MMP9的表达水平的增加。细胞实验结果表明,苍术挥发油细胞毒性较低,在80μg·m L-1以内毒性较小,并显著抑制TNF-α诱导的MH7A细胞异常增殖。3.3基于GC-MS的代谢组学分析苍术挥发油治疗RA的代谢途径经PCA、PLS、OPLS分析,正常组与模型组可以很好地分开,提示正常组与模型组之间的血清代谢产物存在显着差异;并在正常组、模型组、苍术挥发油组大鼠血清中鉴定出了28种共有的内源性代谢物,其中组间具有显著性差异的有12种氨基酸,将12个差异代谢物导入Metabo Analyst3.0分析平台,分析得出苍术挥发油治疗RA有关的6条代谢通路,分别是:精氨酸和脯氨酸代谢;丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代谢;D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢;氨酰基-t RNA的生物合成;半乳糖代谢;牛磺酸和次牛磺酸代谢。4结论本研究通过体内药效学实验确定苍术治疗RA的主要药效部位为挥发油部位,结合体外细胞实验,进一步评价了苍术挥发油对RA良好的治疗作用;采用GC-MS及相关分析初步判断与苍术挥发油治疗RA相关的6种氨基酸及代谢途径。为苍术的临床应用提供参考,并为研发治疗风湿性关节炎药物提供有潜质的中药。