黄芪多糖是中药黄芪的主要有效成分之一,具有提高免疫力、抗肿瘤、抗氧化、抗菌和抗癌等作用。脂质体作为一种新型的给药载体,具有靶向释药、缓释、无免疫原性、降低药物毒副作用,提高生物利用度等优势,近年来作为药物载体已被广泛应用。本研究选择黄芪多糖脂质体(APSL)为研究对象,优化了APSL的制备工艺,测定了APSL的体外、体内增强免疫活性和增强免疫的作用机理,并实际应用到鸡新城疫和猪瘟的免疫。本研究的目的,旨在探讨黄芪多糖和脂质体的协同增强免疫作用,开发新型免疫增强剂,提高畜禽疫苗的免疫效果。研究分为以下6个部分：试验Ⅰ、黄芪多糖脂质体制备工艺的优化 采用薄膜分散-微孔滤膜挤压法制备黄芪多糖脂质体,以包封率和载药量为指标,以脂药比、膜材比和超声时间为因素水平,用L9(34)正交设计对制备条件进行优选,用鱼精蛋白法测定黄芪多糖脂质体的包封率,并用透射电镜测定其形态和粒径。结果显示,薄膜分散-微孔滤膜挤压法制备黄芪多糖脂质体的最佳条件为脂药比为10：1,膜材比8：1,超声时间为20 min。验证试验结果表明,采用最佳条件制备的黄芪多糖脂质体包封率和载药量较高,形态和粒径较均匀,重现性好。试验Ⅱ、黄芪多糖脂质体的体外增强免疫活性的测定用MTT法测定了黄芪多糖脂质体对鸡T、B淋巴细胞增殖的影响,以黄芪多糖(APS)和空白脂质体为对照。结果显示,黄芪多糖脂质体在125～15.625μg·mL-1时既能单独、又能协同PHA显著促进T淋巴细胞的增殖,在125～31.25μg·mL-1时的效果显著优于APS和空白脂质体(P<0.05);APS脂质体在125～15.625μg·mL-1时既能单独、又能协同LPS显著促进B淋巴细胞的增殖,在31.25μg·mL-1时的效果显著优于APS和空白脂质体(P<0.05)。结果表明,APS和脂质体具有协同增强细胞免疫的作用。试验Ⅲ、黄芪多糖脂质体的体内增强免疫活性的测定14日龄蛋公鸡210只,随机均分为7组,除空白对照组外均用新城疫Ⅳ系弱毒疫苗滴鼻、点眼免疫。在首次免疫的同时,3个APSL组和APS组分别肌肉注射3种浓度的APSL和APS注射液,免疫对照组和空白对照组注射等量生理盐水,每天1次,连续3天。分别于免疫后第7、14、21、28天采血,测定淋巴细胞增殖、血凝抑制抗体效价、血清IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的浓度。结果显示,黄芪多糖脂质体能显著促进淋巴细胞增殖,提高血清抗体效价、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10的含量。结果表明,黄芪多糖和脂质体能够协同增强体液免疫、细胞免疫和细胞因子的分泌,中剂量的作用最好。试验Ⅳ 黄芪多糖脂质体对细胞因子的影响用Primer Premier软件分别设计了IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和β-action 5对引物。培养鸡外周血淋巴细胞,分别加入3种浓度的APSL,培养36 h后收集细胞,提取总RNA,用荧光定量RT-PCR方法测定细胞因子mRNA的表达。结果显示,APSL在125、62.5和31.25μg·.mL-1时,能显著促进4种细胞因子mRNA的表达,作用均强于APS和空白脂质体,在62.5μg·mL-1时的作用最强。这可能是APSL增强机体免疫的分子机制之一。试验V黄芪多糖脂质体在鸡新城疫免疫中的应用 从两个鸡场各选择14日龄非免疫健康雏鸡200羽随机均分为4组,每组50羽,除空白对照组外均用新城疫Ⅳ系苗滴鼻点眼免疫,28日龄二免。在首次免的同时,APSL组和APS组分别肌肉注射2 mg·mL-1的黄芪多糖脂质体和黄芪多糖注射液0.5 mL,免疫对照组和空白对照组注射等量生理盐水,每天1次,连续3 d。分别于首免后第7、14、21和28天检测血清HI抗体效价情况。结果显示,黄芪多糖脂质体组在各时间点的抗体效价最高,显著高于其余各组。表明黄芪多糖脂质体能显著提高鸡新城疫苗的免疫应答。试验Ⅵ黄苠多糖脂质体在猪瘟免疫中的应用 从两个猪场各选择30日龄非免疫健康仔猪各200头随机均分为4组,每组50头,除空白对照组外均用猪瘟疫苗免疫。在免疫的同时,APSL组和APS组分别肌肉注射2 mg·mL-1的黄芪多糖脂质体和黄芪多糖注射液2 mL,免疫对照组和空白对照组注射等量生理盐水。分别于首免后第10、20和30天采血,检测血清HI抗体效价。结果显示,黄芪多糖脂质体组在各时间点的抗体效价最高,显著高于其余各组。表明黄芪多糖脂质体能显著增强猪瘟疫苗的免疫应答。