本论文对DPV US4基因进行了分子特性分析,并将该基因进行克隆、原核表达以及利用表达蛋白制备多克隆抗体；此外,建立了基于US4截段基因表达重组蛋白作为抗原的间接ELISA方法以检测鸭瘟病毒抗体,并利用免疫荧光的方法对US4基因产物在DPV感染宿主细胞中的定位和表达时相进行了分析,结果如下：1.鸭瘟病毒US4基因分子特性分析DPV US4基因全长1380bp,编码一条由459个氨基酸残基组成的多肽。序列比对结果发现,DPV US4蛋白(gG)与α-疱疹病毒gG蛋白的氨基酸序列有较高的同源性,通过进化树的分析,结果显示DPV分为单独的一支,并与α-疱疹病毒亚科中传染性喉气管炎病毒属的GaHV-1和PsHV-1具有较近的亲缘关系,揭示α-疱疹病毒亚科中,DPV-CHv应被划为单独的一类。DPV gG推导肽链包含许多膜蛋白的特征,包括含有一个N端信号肽序列,2个跨膜区以及9个N端糖基化位点,进一步的分析显示,其属于Ⅰ型跨膜蛋白；蛋白亚细胞定位的分析表明,该蛋白分别定位于高尔基体、内质网和细胞膜；蛋白二级结构及抗原表位预测结果表明,DPVgG具有良好的抗原性。2.鸭瘟病毒US4基因的原核表达及多克隆抗体的制备通过T克隆及双酶切,将US4基因插入pET-32a(+)从而构建重组表达质粒pET-32a(+)/US4.将重组表达质粒pET-32a(+)/US4转化至表达宿主菌,IPTG进行诱导后,得到的表达蛋白经检测大小与理论值相符。IPTG浓度为1.0 mmol/L,25℃诱导过夜时可获得最佳表达效果,表达的重组融合蛋白主要以包涵体形式存在。运用亲和层析方法对表达蛋白进行纯化,并用纯化后的蛋白免疫家兔制备兔抗gG高免血清。通过Western-blot检测,US4重组蛋白能作为抗原被鸭抗DPV全病毒血清识别,具有较好的反应原性,同时,制备的抗兔gG血清具有较高的特异性,可用其对DPV US4基因产物进行更深入的研究。3.鸭瘟病毒US4截段基因表达重组蛋白作为抗原建立间接ELISA检测鸭瘟病毒抗体根据DPV US4基因的生物信息学分析结果,选取其编码蛋白的主要抗原域(68aa-377aa)并命名为US4M,然后对该截段蛋白进行了原核表达。表达结果说明US4截段重组蛋白在耗时少,耗材少的情况下能够更加高效地表达。通过Western-blot试验,证实高效表达的US4截段重组蛋白具有良好的反应原性,在此基础上,本研究建立了基于DPV US4截段基因表达重组蛋白的间接ELISA方法,以检测鸭瘟病毒抗体。实验结果显示,抗原最佳包被浓度为2.5ug/100μl,可以检测到的DPV阳性血清稀释倍数为1：1280,具有较好的敏感性；批内、批间实验结果显示,利用该截段重组蛋白建立的间接ELISA方法具有较好的重复性,同时,通过特异性实验证实该法具有较好的特异性,可以用于鸭瘟病毒抗体检测。4.鸭瘟病毒体外感染鸭胚成纤维细胞US4基因产物的细胞定位及表达时相分析加入ACV和未加入ACV对感染细胞特异性荧光的出现没有影响,说明DPV US4基因的表达不依赖于病毒DNA的合成,其转录受早期启动子的调控,是一个早期基因；固定并透化的DEF在接种DPV CHv强毒4h检测到细胞质中特异性点状绿色荧光,且该特异性荧光随病毒感染时间的延长而增加,只固定的DEF最早在接种DPV CHv强毒8h检测到细胞膜上特异性绿色荧光。