【摘 要】
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蜜蜂是一种新兴的模式生物,随着蜜蜂基因组测序的完成与进一步完善,阐明这些基因的功能,并对其中具有重大理论意义及经济效益的基因进行开发应用至关重要。本论文利用piggyBac转座子进行蜜蜂转基因研究。利用生物信息学方法分析了中华蜜蜂(Apis cerana cerana)和西方蜜蜂(Apis mellifera)的潜在内源性转座子,得到西方蜜蜂piggyBac转座酶转座元件蛋白4-样序列(Gene
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蜜蜂是一种新兴的模式生物,随着蜜蜂基因组测序的完成与进一步完善,阐明这些基因的功能,并对其中具有重大理论意义及经济效益的基因进行开发应用至关重要。本论文利用piggyBac转座子进行蜜蜂转基因研究。利用生物信息学方法分析了中华蜜蜂(Apis cerana cerana)和西方蜜蜂(Apis mellifera)的潜在内源性转座子,得到西方蜜蜂piggyBac转座酶转座元件蛋白4-样序列(Gene ID:100576623)一个,和中华蜜蜂piggyBac转座酶转座元件蛋白(GenBank:PBC25285.1)一个。前者为1799bp的核酸序列,编码294个氨基酸;后者为579bp,编码192个氨基酸,经初步分析验证其具有转录活性。对德国杜塞尔多夫大学进化遗传学实验室Martin Beye教授馈赠的3种转座质粒,进行酶切、测序等方法验证其基本结构信息。另外将外源质粒注射进西方蜜蜂卵中评估其质粒表达活性,并通过反转录PCR检测到目的条带,证实这些质粒在蜜蜂卵中有表达。在以上研究的基础上,本论文探讨piggyBac载体在西方蜜蜂(Apis mellifera)中的基因转移功能,PCR扩增和测序分析结果显示piggyBac转座子能够将外源性Rubia红色荧光蛋白基因整合到蜜蜂基因组上,且在显微注射组中检测到微弱的红色荧光蛋白表达。本研究证实piggyBac转座子系统可将外源性基因植入蜜蜂基因组。
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