桦褐孔菌子实体中α-葡萄糖苷酶抑制成分的提取分离研究

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α-葡萄糖苷酶抑制剂可以竞争性抑制小肠内α-葡萄糖苷酶的活性,延缓葡萄糖在肠道内的吸收,从而有效地降低餐后的高血糖,目前已被广泛用于糖尿病的防治。食用菌是一大类具有很高食用及药用价值的高等真菌,由于真菌代谢产物具有多种结构类型及生理活性,因此是寻找新的天然药物的重要来源。本文首先测定了十三种食用菌提取物在一定浓度下的α-葡萄糖苷酶抑制活性,以最大抑制率计,抑制强度为桦褐孔菌>针裂蹄>香菇。其半抑制浓度分别为:桦褐孔菌提取物0.015mg/mL,针裂蹄提取物0.038mg/mL,香菇提取物2.2mg/mL,与阳性对照阿卡波糖的半抑制浓度4.2mg/mL相比,桦褐孔菌提取物、针裂蹄提取物分别为阿卡波糖的280倍和110倍,而香菇提取物为阿卡波糖的2倍。在与其他十三种食用菌的α-葡萄糖苷酶抑制活性比较基础上,采用生物活性指导下的导向分离方法,将桦褐孔菌子实体按所含成分极性的不同进行分部提取,结果石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、乙醇剩余提取物、乙醇提取物及粗多糖部分对酶活性抑制的IC50值分别为0.35mg/mL,0.25mg/mL,0.12mg/mL,0.15mg/mL,0.4mg/mL和0.024mg/mL。表明桦褐孔菌粗多糖部分相比其他部分对α-葡萄糖苷酶有更强的抑制效果。通过单因素及正交试验对桦褐孔菌多糖提取的影响因素进行了研究,对影响的主次顺序为:料液比>温度>时间,提取的最佳条件为:料液比1:20,提取温度为100℃,提取时间是2h。并对分级醇沉的桦褐孔菌粗多糖进行α-葡萄糖苷酶抑制活性作用比较,其中60%醇沉组分的效果最好,其IC50值为10μg/mL,且得率高、溶解性较好,因此对其进一步分离纯化。经离子柱层析、凝胶柱层析分离纯化得到IO11、IO12、IO2三个多糖活性组分,分别测定其对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,结果显示纯化后的组分对α-葡萄糖苷酶的抑制活性都较原液高,其中组分I011的抑制效果最明显。对不同浓度的组分IO11溶液测定其α-葡萄糖苷酶抑制率,可以得出其IC50值约为8μg/mL。
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