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目的:运用电穿孔质粒转染、活组织离体培养和免疫荧光技术,观察鸡胚后脑中,背侧抑制性轴突导向蛋白(dorsal repulsive axon guidance protein,draxin)对23C10阳性神经元轴突投射的影响,初步探讨draxin在鸡胚后脑神经元轴突投射过程中的调控作用。 方法:选用正常发育的白来亨鸡受精卵,应用免疫组化方法检测HH18-19、HH21-22、HH25-26阶段鸡胚后脑内draxin蛋白与23C10阳性神经元及其轴突的表达分布情况;应用离体活组织切片与draxin-AP融合蛋白体外共孵育的方法,检测23C10阳性神经元及其轴突是否具有与draxin蛋白在体外结合的能力;选取HH13-14阶段鸡胚,对后脑区域分别进行跨膜型draxin、分泌型draxin和空白质粒的电转过表达,通过免疫组织化学染色方法,观察孵育到HH25-26阶段鸡胚后脑内23C10阳性神经元轴突的投射情况;选取HH20-21阶段鸡胚,剥离后脑,以含draxin蛋白的条件培养基进行活组织离体培养,检测draxin对鸡胚后脑神经元轴突生长的影响。 结果: 1、 HH18-26发育阶段的鸡胚后脑内,draxin蛋白主要分布在基底节的封套层内。 2、 HH18-26发育阶段的鸡胚后脑内,23C10阳性神经元则在后脑基底节封套层内形成。 3、23C10阳性神经元及其轴突具有与draxin蛋白在体外直接结合的能力。 4、跨膜型draxin过表达后,有较多23C10阳性神经元的轴突异常投射到同侧后脑背侧部;分泌型 draxin过表达后,有少部分23C10阳性神经元的轴突异常投射到同侧后脑背侧部。正常鸡胚和空白质粒过表达对照组均未观察到异常投射的神经元轴突。 5、鸡胚后脑活组织离体培养中,draxin显著抑制体外培养组织内轴突的生长,而对照组可见体外培养的组织内有大量轴突形成。 结论: 1、在鸡胚后脑发育过程中,draxin分布在23C10阳性神经元及其轴突附近;draxin的表达分布与23C10阳性神经元及其轴突的生长发育具有时间、空间相关性。 2、 draxin与23C10阳性神经元及其轴突具有相互结合的能力。 3、 draxin能够从体内、体外两种水平抑制鸡胚后脑神经元轴突的生长。