【摘 要】
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研究目的:哺乳动物的胎盘可为胎儿在液体环境提供气体交换。出生时胎儿会发生从水呼吸环境到空气呼吸环境的过渡,该过程要求肺部具有正常的结构和功能,因为肺为氧气和二氧化碳的交换提供了大的表面积。SDR9C7（又称SDR-O）基因编码短链脱氢酶/还原酶家族9C成员7,在对小鼠的Sdr9c7基因进行敲除后,发现Sdr9c7-/-小鼠出现呼吸性抽搐症状,且在出生后数小时后死亡。目前Sdr9c7基因对肺发育的影
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研究目的:哺乳动物的胎盘可为胎儿在液体环境提供气体交换。出生时胎儿会发生从水呼吸环境到空气呼吸环境的过渡,该过程要求肺部具有正常的结构和功能,因为肺为氧气和二氧化碳的交换提供了大的表面积。SDR9C7（又称SDR-O）基因编码短链脱氢酶/还原酶家族9C成员7,在对小鼠的Sdr9c7基因进行敲除后,发现Sdr9c7-/-小鼠出现呼吸性抽搐症状,且在出生后数小时后死亡。目前Sdr9c7基因对肺发育的影响知之甚少。本研究着重探讨Sdr9c7基因对小鼠肺发育的影响。研究方法:（1）Sdr9c7基因敲除鼠的繁殖与基因型鉴定:在小鼠出生1周内对小鼠进行编号并采集小鼠组织提取DNA,以所提的DNA为模板进行PCR扩增,然后对PCR产物进行基因测序,根据碱基序列及测序图谱确定子代鼠的基因型;（2）Sdr9c7基因敲除鼠后代基因型统计:对新生鼠进行基因型鉴定,统计分析其基因型比例;（3）Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-新出生幼崽出生0 h,5 h和8 h外观观察、体重的统计和死亡时间确认;（4）P0小鼠肺组织外观观察、称重及石蜡切片HE染色,显微观察野生型小鼠Sdr9c7+/+和基因敲除Sdr9c7-/-小鼠肺的形态结构,并比较二者之间差异;（5）分离出小鼠肺组织并使用Trizol法提取RNA,q RT-PCR法检测Sdr9c7在P0小鼠各组织的表达情况;（6）q RT-PCR、Western blot法检测Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠肺上皮细胞分化标志物的表达情况,免疫组织化学、流式细胞分析检测Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠肺中AT2的数量差异;（7）i TRAQ/TMT标记定量分析Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-肺蛋白表达差异,q RT-PCR验证Sdr9c7+/+与Sdr9c7-/-小鼠肺中与肺发育相关基因的表达情况。研究结果:（1）杂合子鼠与杂合子鼠配种后的新生小鼠在出生5小时内,能检测到敲除纯合子活鼠,且其子代小鼠基因型Sdr9c7+/+、Sdr9c7+/-和Sdr9c7-/-的比例为1:2:1。P1后代中只有野生型和杂合子两种基因型,并未检测到纯合子小鼠,其基因型比例为Sdr9c7+/+:Sdr9c7+/-:Sdr9c7-/-≈1:2:0,表明Sdr9c7-/-新生小鼠出生致死。（2）与Sdr9c7+/+型和Sdr9c7+/-新生鼠相比,出生后Sdr9c7-/-新生小鼠的身体表现出非正常表型,刚生下来时体色更红,约5h时可明显看到其身体出现发绀并随时间的推移而加重,皮肤逐渐皱褶、皱缩、干燥;呼吸也逐渐困难直至抽搐死亡;一般在出生后8h内死亡。（3）肺组织石蜡切片HE染色结果显示,Sdr9c7-/-小鼠的肺组织出生后明显充血、肺泡发育不良、未能完全扩张,肺泡小且肺泡隔明显增厚。（4）Sdr9c7在P0小鼠肺组织中表达量最高。（5）P0 Sdr9c7-/-小鼠的肺组织中AT2细胞数量明显增多,有显著性差异;pro SP-C、SP-B、T1α、TTF1蛋白表达量显著增加;CC10蛋白表达量则显著减少。（6）蛋白质组学检测结果显示,P0 Sdr9c7-/-与Sdr9c7+/+小鼠肺中有51个蛋白呈显著差异,5个蛋白明显增加,46个蛋白明显减少;P0 Sdr9c7-/-小鼠肺中TGF-β3、Shh、Dlk-1、FGF-1和FGF-10表达升高,有显著性差异;Wnt2和C/EBPα的表达量减少,有显著性差异。结论:Sdr9c7基因的缺失会导致Sdr9c7-/-新生鼠肺泡腔变窄、间质间隔增厚,出生后约8h内死亡;与肺发育成熟的相关基因表达呈现一致性的增加或减少,肺上皮细胞异常分化而出现肺发育不全。
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