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目的：本论文研究旨在探索氧化应激是否介导酒精对高尔基体SPCAl的影响,以及神经生长因子是否具备改善酒精毒性的作用,为酒精相关疾病治疗提供新思路。方法：1.培养小鼠神经细胞瘤N2A细胞,建立酒精封闭系统；2.实验分三个模块：急性酒精作用模块、抗氧化剂NAC预处理模块、神经生长因子NGF预处理模块；3.光学显微镜、MTT法评价急性酒精作用对N2A细胞生存的影响；4.荧光显微镜、流式细胞仪观察及检测细胞内氧化应激水平；5.多功能酶标仪检测细胞内游离钙离子浓度的变化；6.实时荧光定量PCR检测基因ATP2C1表达变化；7. Western blot检测蛋白SPCAl表达变化。结果：1.急性酒精作用后,小鼠N2A细胞形态结构无明显变化,MTT吸光度值变化无统计学差异,说明酒精200mM浓度以下24h作用对小鼠神经细胞瘤N2A细胞生存无明显影响；2.急性酒精作用后,各浓度酒精亚组均较空白组细胞荧光强度高,且随酒精浓度上升逐渐增大,在酒精100mM浓度荧光强度增幅最大(16.3%),随后小幅下降。NAC预处理后,NAC1mM、2mM浓度下细胞内氧化应激相比单独酒精作用无明显变化,仅在NAC4mM浓度下细胞内氧化应激较单独酒精作用组低,降幅为3.7%。3.急性酒精作用后,各浓度酒精亚组均较空白组细胞内游离钙离子浓度增高,且随酒精浓度上升逐渐增大,在100mM浓度时增幅最大(22.4%),随后小幅下降。NAC预处理后,各浓度NAC亚组细胞内游离钙离子浓度均较单独酒精作用组明显降低,且下降程度随NAC浓度上升逐渐增大,在4mM浓度降幅最大(31.8%)。NGF预处理后,各浓度NGF亚组的细胞内游离钙离子浓度均较单独酒精作用组明显降低,且下降程度随NGF浓度上升逐渐增大,在50ng/ml浓度时降幅最大(31.4%),随后小幅下降。4.急性酒精作用后,各浓度酒精亚组基因ATP2C1、蛋白SPCA1表达水平均较空白组升高,且随酒精浓度上升逐渐增大,在200mM浓度时达最大增幅(45%,34.9%)。NAC预处理后,各浓度NAC亚组基因ATP2C1、蛋白SPCA1表达水平均较单独酒精作用亚组下降,且下降程度随NAC浓度升高而增大,在4mM浓度下降幅度最大(30%,12%)。NGF预处理后,各浓度NGF亚组基因ATP2C1、蛋白SPCA1表达水平均较单独酒精作用亚组升高,且上升程度随NGF浓度升高而增大,在100ng/ml浓度时表达最高(16%,6%)。结论：1.急性酒精作用导致了细胞内氧化应激、钙超载,上调了SPCA1的表达。2.NAC预处理可缓解急性酒精所致细胞内氧化应激、钙超载,下调SPCAl表达。3.NGF预处理可上调SPCAl表达,缓解急性酒精所致细胞内钙超载。图17幅,表12张,参考文献105篇