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目的:1观察藏药二十五味儿茶凝胶(以下简称:儿茶凝胶)外治2,4-二硝基氯苯(dinitrochloro-benzo,DNCB)所致慢性湿疹模型,与丁酸氢化可的松软膏(尤卓尔)疗效相比较,探讨藏药二十五味儿茶凝胶对脾脏与胸腺指数、模型皮损及病理形态改善的实验意义,为治疗本病安全有效藏药凝胶制剂的开发提供实验基础。2通过检测实验后皮损内细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管内皮细胞黏附分子-1(VCAM-1)、淋巴细胞功能相关分子(LFA-1)、极迟抗原-4(VLA-4)蛋白及其m RNA基因的表达水平,解析儿茶凝胶外治慢性湿疹的分子生物学机制,及其特性靶点,为此药治疗慢性湿疹提供理论依据。方法:将60只Wistar大鼠按体重随机分为空白组和造模组;建模成功后将造模组随机分为模型组、尤卓尔组、儿茶凝胶高、中、低剂量治疗组。除空白组外,其他组实验前1d,腹部2.0cm×2.0cm备皮,实验第1d,持移液枪吸取7%DNCB丙酮液100μL涂搽大鼠腹部致敏,第2d强化1次,第5d大鼠背部3.0cm×3.0cm剃毛并脱毛,第6d背部备皮区涂抹1%DNCB丙酮液200μL激发,每间隔3d 1次,共6次。造模结束:造模组中随机抽出6只,观察皮损形态与切下皮损HE染色,符合慢性湿疹皮损、病理形态,即提示造模成功。末次造模48h后,各组进行皮损面积、严重度EASI评分后,分别经皮予尤卓尔、儿茶凝胶高(0.35g/kg)、中(0.21g/kg)、低(0.14g/kg)剂量,2次/d,连续14d;(1)EASI评分、称体质量;(2)隔24hr,取脾脏、胸腺(称量测其指数)及用药区皮肤组织(部分4%多聚甲醛,部分-80℃冻存),HE染色观察组织形态,Western blot、qPCR分别检测ICAM-1、VCAM-1、LFA-1、VLA-4蛋白及其m RNA基因的表达。结果:1脾脏、胸腺指数比较:实验后各组脾脏、胸腺指数,与空白组比较,模型组统计差异极显著(P<0.001);与模型组相比,尤卓尔组、儿茶凝胶高、中、低剂量组具有统计学意义(P<0.05);与尤卓尔组比较,儿茶凝胶高、低剂量组统计差异显著(P<0.01);与儿茶凝胶中剂量组比较,儿茶凝胶高、低剂量组统计差异显著(P<0.01)。2皮损积分差值比较:各组病损皮肤在红斑(E)、硬肿(水肿)/丘疹(I)、表皮剥脱(Ex)、苔癣化(L)等积分治疗前后差值统计学差异显著(P<0.01),与模型组比较,尤卓尔组、儿茶凝胶高、中、低剂量组有统计差异(P<0.05);与尤卓尔组比较,儿茶凝胶高、低剂量组有统计差异(P<0.05);与儿茶中剂量组比较,儿茶凝胶高、低剂量组有统计差异(P<0.05)。3 HE染色:与空白组比较,模型组表皮突延长、棘层肥厚、角化过度或不全、细胞间水肿及炎性细胞浸润明显;与模型组病理形态对比,尤卓尔组、儿茶凝胶高、中、低剂量组都有差异;与尤卓尔组相比,儿茶凝胶中剂量组、空白组组织形态相近,儿茶凝胶高、低剂量组组仍然存在病理形态改变。4 Western blot:ICAM-1、LFA-1、VCAM-1、VLA-4相对蛋白表达量,与空白组比较,模型组统计学有差异(P<0.05);与模型组比较,尤卓尔、儿茶凝胶高、中、低剂量组统计差异显著(P<0.01);与尤卓尔组比较,儿茶凝胶高、低剂量组有统计差异(P<0.05);与儿茶凝胶中剂量组比较,儿茶凝胶高、低剂量组统计差异显著(P<0.01)。5 qPCR:ICAM-1、LFA-1、VCAM-1、VLA-4mRNA表达水平,与空白组比较,模型组统计差异极显著(P<0.001);与模型组相比,尤卓尔、儿茶凝胶高、中、低剂量组统计差异极显著(P<0.001);与尤卓尔组比较,儿茶凝胶高、低剂量组统计差异极显著(P<0.001);与儿茶凝胶中剂量比较,儿茶凝胶高、低剂量组统计差异极显著(P<0.001)。结论:1 ICAM-1、VCAM-1、LFA-1、VLA-4在模型组的蛋白量、mRNA水平表达均高于空白组,与EASI评分呈正相关,提示其可能参与慢性湿疹的发病。2藏药二十五味儿茶凝胶可降低胸腺、脾脏指数,能有效消退丘疹、控制红斑、减轻水肿、防治脱屑、抑制苔癣化等症状和纠正表皮过度角化、表皮突延长、棘层增厚等病理组织变化,可下调细胞粘附分子ICAM-1、VCAM-1、LFA-1、VLA-4蛋白量及其mRNA的表达,且其中剂量与尤卓尔药效相当,呈一定的量效关系,为外治大鼠慢性湿疹皮损的有效作用机制。