目的香薷为唇形科植物石香薷Mosla chinensis Maxim或江香薷Mosla chinensis‘Jiangxiangru’干燥地上部分,其性辛、微温,具有发汗解表、化湿和中、利水消肿等功效。传统加工方法为在产地除去残根和杂质,阴干后运至饮片厂,在饮片厂进行软化、切段、干燥。工艺繁琐,易导致化学成分改变,和有效成分流失。为此,本课题将香薷产地加工与炮制生产相关工序进行有机整和,即在产地净制后,趁鲜切制,干燥,提高香薷饮片质量。通过对产地加工炮制一体化与传统切制香薷的等量性和等效性研究,验证香薷产地加工炮制一体化技术实施的可行性,通过对湿困脾胃证大鼠作用研究,为香薷化湿和中的传统功效提供现代药理学依据,以期为临床合理用药提供参考。材料与方法材料:香薷于2016年9月采自江西新余和湖南长沙,经辽宁中医药大学尹海波教授鉴定为唇形科植物石香薷Mosla chinensis Maxim的干燥地上部分。方法:1.香薷产地加工炮制一体化与传统切制比较研究采用正交实验设计法,以软化时间、切制段长、烘干温度作为传统切制工艺的考察因素,以切制段长、烘干温度、烘干时间作为产地加工炮制一体化工艺的考察因素,以香荆芥酚、麝香草酚、挥发油含量为综合评价指标,分别优化传统切制和产地加工炮制一体化工艺,并对2个优选出的工艺进行对比研究。2.香薷产地加工炮制一体化中试研究在实验室小试数据基础上,按照筛选出的切制和干燥工艺,以江西香薷100 kg/批次,共3个批次进行中试研究,即趁鲜切制1.0 cm,50~60℃干燥36 h,进行中试放大研究。3.产地加工炮制一体化和传统切制香薷中酚类、黄酮类成分含量比较以山奈酚、香荆芥酚、麝香草酚等酚类化合物和木犀草素、芹菜素、黄芩素-7-甲醚等黄酮类化合物为考察指标,比较产地加工炮制一体化与传统切制香薷化学成分的含量。4.GC-MS分析产地加工炮制一体化技术对香薷挥发油成分的影响采用GC-MS分析传统切制和产地加工炮制一体化香薷挥发油中的化学成分。色谱柱:HP-5MS石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)。柱温:初始温度60℃,保持2 min,以5℃/min升温至190℃,保持6 min,再以5℃/min升至250℃,保持5 min;载气为氦气;50∶1分流进样;进样口温度为250℃;柱流量为110℃/min;对GC-MS结果进行对比分析。5.对LPS致热大鼠作用比较研究采用皮下注射LPS建立热证大鼠模型,观察发热大鼠体温变化情况,采用ELISA法检测大鼠血清前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环磷酸腺苷(CAMP)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肝组织髓过氧化物酶(MPO)水平,比较产地加工炮制一体化与传统切制香薷对LPS致热大鼠的影响。6.对肺阳虚大鼠作用比较研究采用烟熏(外邪犯肺)+冰水游泳(形寒劳倦)+服用冰水(内饮生冷)三因素复合,连续处理30天,造成肺阳虚大鼠模型,观测大鼠一般体征,肛温,自主活动,取肺组织做病理形态观察并通过免疫组织化学法观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的阳性表达,测定血液学指标,并采用ELISA法检测大鼠血清一氧化氮(NO)、免疫球蛋白G(IGG)、丙二醛(MDA)、血栓素B2(TXB2)和白细胞介素-8(IL-8)水平,计算心、肝、脾、肺、肾等脏器系数,从而分析香薷对肺阳虚大鼠的治疗作用。7.对肺阴虚大鼠作用比较研究釆用灌服甲状腺片+烟熏制备肺阴虚大鼠模型,连续处理30天,造成肺阴虚大鼠模型,观测大鼠一般体征,肛温,取肺组织做病理形态观察并通过免疫组织化学法观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的阳性表达,取血测定尿素(BUN),白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、胆固醇(CHO),并采用ELISA法检测大鼠血清白细胞介1(IL-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、环磷酸腺苷(CAMP)、环磷酸鸟苷(CGMP)水平,计算心、肝、脾、肺、肾等脏器系数,探讨香薷对肺阴虚大鼠的影响。8.对耳肿胀小鼠和RAW264.7炎证细胞作用比较研究将KM种雄性小鼠随机分组,每组8只。灌胃给药治疗7 d,复制耳肿胀模型,计算肿胀度和肿胀抑制率。以不同浓度的香薷挥发油(产地加工炮制一体化、传统切制)、香薷水煎液(产地加工炮制一体化、传统切制)、香薷挥发油与水煎液混合物(生药量等同)(产地加工炮制一体化、传统切制)作用于正常的和LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞,筛选出最佳浓度,并研究各香薷样品对LPS刺激的RAW264.7细胞的细胞存活率、吞噬率和NO指标的影响,研究香薷的抗炎作用。9.香薷对湿困脾胃证模型大鼠作用研究以饮食不节、潮湿环境、强迫游泳方法建立湿困脾胃证大鼠模型。SD大鼠随机分组,造模后,灌胃给药治疗7天,测量大鼠体质量、进食量、饮水量、排尿量、大便量、脾脏及胸腺的脏器系数及胃排空、小肠推进率和肠管含水量等指标,并检测大鼠血清胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)、Na+-K+-ATP酶、淀粉酶(AMS)、白细胞介素-6(IL-6)、免疫球蛋白(Ig G)和消化道水通道蛋白2(AQP2)和病理改变等指标,对结果进行对比分析,研究作用机制。结果1.香薷传统切制与产地加工炮制一体化比较研究产地加工炮制一体化工艺为:趁鲜切制1.0 cm,50~60℃干燥36 h,该最佳工艺下测得的香荆芥酚、麝香草酚、挥发油含量均高于传统切制工艺。2.香薷产地加工炮制一体化中试研究中试三个批次样品香荆芥酚、麝香草酚、挥发油平均含量分别为:0.1415mg/g、0.6616mg/g、1.06%m L/g,均略高于小试数据,说明操作稳定可靠,可适用于工业大生产。3.产地加工炮制一体化和传统切制香薷中酚类、黄酮类成分含量比较香荆芥酚和麝香草酚作为历版药典收载的香薷中的主要药效活性成分,在产地加工炮制一体化中含有量比传统切制中分别高9倍和2倍以上,两工艺香薷中的山奈酚含量相差不大。香薷产地加工炮制一体化中木犀草素和黄芩素-7-甲醚含量均远远高于传统切制。4.GC-MS分析产地加工炮制一体化技术对香薷挥发油成分的影响采用产地加工炮制一体化技术制备的不同产地香薷中分别鉴定出42种(江西)和32种成分(湖南),传统切制香薷中分别鉴定出37种(江西)和34种成分(湖南)。其中作为香薷中最主要的指标性药效成分,香荆芥酚和麝香草酚的含量,在产地加工炮制一体化香薷中更高。湖南、江西不同产地存在7种非共有成分,除2-茨醇是湖南香薷特有成分外,其余6种化学成分均只在江西香薷中检出。5.对LPS致热大鼠作用比较研究与模型组比,各给药组大鼠均肛温降低,PGE2、TNF-α、CAMP、IL-1β、MPO含量降低,且无论是香薷水煎液还是香薷挥发油,产地加工炮制一体化组均比传统切制组治疗效果更好,差异有统计学意义(P<0.05),并表现出显著量效关系。6.对肺阳虚大鼠作用比较研究香薷挥发油和水煎液均能改善肺阳虚大鼠一般体征和自主活动,提高肺阳虚大鼠体质量、肛温、血清IGG含量(P<0.01或P<0.05),降低大鼠心、肝、脾、肺、肾脏器系数,血清NO、MDA、TXB2、IL-8含量(P<0.01或P<0.05)、血白细胞水平和大鼠肺组织中TNF-α总阳性表达面积和平均光密度,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),且无论是挥发油还是水煎液,均为产地加工炮制一体化组作用趋势较大。7.对肺阴虚大鼠作用比较研究香薷有改善肺阴虚大鼠一般体征和自主活动,提高肺阴虚大鼠体质量、ALB、TP、c GMP含量,降低血清IL-1β、CHO、BUN含量、大鼠心、肝、脾、肺、肾脏器系数,和肺组织中TNF-α阳性表达的趋势,对肺阴虚大鼠IL-1、c AMP影响不大,产地加工炮制一体化香薷挥发油和水煎液作用趋势略大。8.对耳肿胀小鼠和RAW264.7炎证细胞作用比较研究在体内耳肿胀试验中,与模型组比较,香薷各样品组均具有治疗耳肿胀的作用,且以香薷产地加工炮制一体化水煎液组作用效果最好,在体外LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型中,香薷各样品组均具有增强细胞抗炎作用,且以香薷产地加工炮制一体化水煎液组作用效果明显,实验结果具有一致性。9.香薷对湿困脾胃证模型大鼠作用研究与模型组比较,香薷挥发油和水煎液组大鼠体质量、摄食量、饮水量、小便量、脾脏及胸腺的脏器系数、胃排空和小肠推进率均增加,大便湿重和肠管含水量均减少,大鼠血清Na+-K+-ATP酶、AMS活性增强,GAS、Ig G含量增加,IL-6、MTL、消化道AQP2含量减少,差异有统计学意义(P<0.05);除小肠推进率和肠管含水量和MTL水煎液对大鼠的作用略优于挥发油外,其余指标均是挥发油对大鼠的作用效果显著。结论本课题采用正交实验设计法优化了香薷产地加工炮制一体化工艺,所得参数稳定,操作简单,适应于工业大生产的操作。香薷产地加工炮制一体化较传统切制法有效成分含量高,在化学成分等量性角度证明香薷产地加工炮制一体化技术实施的可行性。香薷产地加工炮制一体化对LPS致热大鼠、肺阳虚和肺阴虚大鼠、耳肿胀小鼠和RAW264.7炎证细胞等作用,均优于传统切制法。综上五个实验,在现代药理学的等效性考察上,均验证了香薷经过产地加工炮制一体化后,质量更好。通过香薷产地加工炮制一体化技术规范研究,从化学成分等量性、药理作用等效性方面均证明香薷产地加工炮制一体化技术能够减少成分流失、提高饮片疗效,具有实施的可行性。通过香薷对湿困脾胃证大鼠作用研究,发现其具有良好的化湿和中作用。