论文部分内容阅读
rsmA是次生代谢的一种全局调控基因。为了研究荧光假单胞菌M18中rsmA对抗生素吩嗪-1-羧酸和藤黄绿菌素的调控作用，运用PCR方法，从荧光假单胞菌M18基因组中，扩增出rsmA基因部分片段并进行了测序。
以rsmA基因片段为探针，从M18的基因组柯斯文库中筛出阳性克隆，切取带有rsmA基因及两侧序列的1.5kb片段，中间插入编码Kmr的DNA片段，获得rsmA-体外突变体。运用同源重组剔除技术，构建了M18菌株的rsmA突变株M18R-。从发酵液中提取抗生素通过HPLC检测。
将通过PCR获得的完整rsmA基因插入pME6032强启动子下游，阳性克隆转化M18R-，经IPTG诱导使rsmA基因在突变菌株中过量表达，结果在细菌的整个生长周期中检测不到有PLT的产生，PCA产量相对突变菌株有所提高。PCR扩增得到pltA和phzA片段，克隆到穿梭质粒pME6015的无启动子lacZ的上游，构建翻译融合pltA-lacZ和phzA-lacZ，相应质粒命名为pMETA和pMEZA，分别转化M18和M18R-后进行β-半乳糖甘酶活性分析。
用液体培养方法检测几种矿物质和碳源对M181R-抗生素产量的影响。通过在培养基中添加PLT检测M18G-的PCA产量及检测M18Z-的PLT合成水平初步证明了荧光假单胞菌M18的两种抗生素合成存在着相互影响。