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食管癌(esophageal cancer,EC)是一种发病率占全球癌症第八位、致死率占第六位的消化道恶性肿瘤,其男性发病率高于女性。EC主要分为食管鳞状细胞癌(esophageal squamouscell carcinoma,ESCC)、食管腺癌(esophageal adenocarcinoma,EAC)和未分化癌,我国是ESCC发病率最高的国家之一。食管癌的早期症状不明显,确诊时大多已属中晚期。由于ESCC患者的预后影响因素复杂,很难对其进行有效的预后判断来提高患者生存率。目前,淋巴结非转移患者术后五年的生存率为20%-30%,而转移患者术后五年的生存率仅为13%,因此寻找有效的ESCC诊断、手术疗效评估和预后标志物迫在眉睫。微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类长约19-24个核苷酸的非编码内源性单链小分子RNA,通过碱基互补配对的方式与靶mRNA序列的3’端非翻译区(3’untranslated region,3’-UTR)完全或部分结合,从而抑制靶基因的表达或促使其降解。一些miRNA在肿瘤组织和正常组织中的表达水平差异显著,具有肿瘤组织特异性。在对前列腺癌、结肠癌、胰腺癌和食管癌等癌症的早期研究中发现,患者血清中miRNA表达谱呈现出特异性变化,提示血清miRNA可作为一种潜在的新型标志物用于肿瘤的早期诊断或预后评估。因此,我们推测ESCC患者血清中存在的特异miRNA,有望成为ESCC患者诊断、手术疗效或预后评估的有效标志物。目的：筛选ESCC患者血清中显著升高而在术后则明显降低的血清miRNA,评价其对ESCC患者的临床应用价值。方法：收集未经任何治疗的63例ESCC患者术前血清样本和对应的术后1-2周的血清样本,同时以其中26例患者术后两周以后的血清样本作为预后研究对象,以63例年龄、性别匹配的正常人血清作对照。首先运用低密度芯片技术对28例ESCC患者和28例正常人组成的两份混合血清中768种miRNA的表达量进行测定,筛选出与正常人相比在ESCC患者血清中表达上调的血清miRNA。其次,运用实时荧光定量PCR技术(quantitive real-time PCR,qRT-PCR)对部分低密度芯片初筛的miRNA及部分ESCC组织或癌细胞中表达异常的消化系统肿瘤相关miRNA在复筛组(18例ESCC患者术前术后血清和18例正常血清)中逐-测定,筛选出在患者血清中显著升高的miRNA。然后运用qRT-PCR技术在验证组(45例ESCC患者术前术后血清和45例正常血清)中验证,筛选复筛组和验证组中与预后相关的miRNA,用以评估其对ESCC患者的手术疗效。最后对26例患者术后两周以后进行跟踪检测,根据病人回访生存情况及统计学方法评价其在预测患者生存状况方面的价值。结果：低密度芯片结果显示,ESCC患者血清miRNA表达谱与正常人具有显著差异,其中21种miRNA在患者血清中的表达明显上调(2倍以上),从中选取4种miRNA(Ct<25)及ESCC组织或癌细胞中表达异常的消化系统肿瘤相关的7种miRNA(包括miRNA-7、25、31、100、141、1247、193a-3p、194、223、337-5p及483-5p)用qRT-PCR技术在复筛组中验证,发现其中9种miRNA(miR-25、31、100、193a-3p、223、194、141、337-5p和miR-483-53p)在患者术前血清中的表达量较止常人显著上升(变化倍数为1.57～6.42倍,P<0.05)；验证组中9种miRNA在ESCC患者术前血清中依然显著升高(变化倍数为1.47～8.09倍,P<0.05)。其中有5种miRNA (miR-141、193a-3p、194、223及337-5p)在患者术后较术前显著降低。9种术前较正常对照显著升高的miRNA的ROC曲线下面积分别为miR-25(AUC=0.845,95%CI=0.775～0.914), miR-31(AUC=0.748,95%CI=0.663～0.833), miR-100(AUC=0.785,95%CI=0.705～0.866), miR-141(AUC=0.716,95%CI=0.626～0.806), miR-193a-3p (AUC=0.861,95%CI=0.796～0.927), miR-194(AUC=0.827,95%CI=0.755-0.899), miR-223(AUC=0.778,95%CI=0.699～0.857), miR-337-5p (AUC=0.878,95%CI=0.812～0.943), miR-483-5p (AUC=0.84,95%CI=0.79～0.89).9种niRNA的AUC明显高于CEA (AUC=0.578,95%CI=0.473-0.682)。根据选定的cut off值,9种血清miRNA对ESCC诊断的灵敏性和特异性分别是：miR-25为71%和86%,miR-31为62%和81%,miR-100为68%和81%,miR-141为50%和86%,miR-193a-3p为75%和89%,miR-194为62%和90%,miR-223为65%和79%,miR-337-5p为78%和91%,miR-483-5p为75%和82%。在对其中26例患者术后两周以后样本的研究结果中发现,miR-141、194在死亡患者术后1～2周血清中明显降低,但在术后两周以后样本中均有升高的趋势；miR-223的含量变化与患者病情及生存状况呈显著相关。单因素相关性分析显示,miR-141、337-5p与ESCC病理分型呈显著正相关,miR-141、223、100与ESCC的TNM分级呈显著正相关,因此,这几种miRNA可能在ESCC的发生、发展过程中起重要作用。结论：ESCC患者术前血清样本中9种miRNA (miR-25、31、100、141、193a-3p、194、223、337-5p和miR-483-5p)与正常人相比显著升高,具潜在的ESCC早期诊断价值；其中5种miRNA(miR-141、223、337-5p、194和miR-193a-3p)在患者术后样本中显著降低,具评价手术效果潜能；而miR-194、141在死亡ESCC患者术后1～2周时降低,而在术后两周以后血清中的表达均有升高的趋势,具有评估ESCC患者病情的潜能；miR-223在患者术后两周以后的含量变化与患者的病情发展显著相关,具有预后评估能力。