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目前,随着我国进入老龄化社会,骨质疏松症和心血管疾病等严重威胁着人类的健康,给老年人的生活带来了严重的影响。鲑鱼降钙素(Salmon Calcitonin,sCT)是天然降钙素中活性最高的一种,对于治疗骨质疏松症有着很好的疗效。降钙素基因相关肽(Calcitonin Gene Related Peptide,CGRP)是迄今为止发现的最强大的内源性扩血管肽类物质,是治疗心血管疾病的首选药物之一。临床上为了治疗骨质疏松症、心血管疾病等老年人常见疾病,对鲑鱼降钙素和降钙素基因相关肽的需要与日俱增,因此,能够获得一种双效的药用蛋白成为了人们日益关注的问题。
本实验利用基因工程的方法设计并合成了鲑鱼降钙素和降钙素基因相关肽融合基因,将该基因克隆到pGEX-6p-1表达载体上,并且,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21中进行表达。利用IPTG作为诱导剂,分析比较不同诱导温度,不同诱导时间和不同IPTG终浓度条件对蛋白表达量的影响,从而确定最佳诱导表达条件。
结果表明,成功构建了大肠杆菌表达载体pGEX(CGRP/msCT)。目的蛋白的最佳诱导温度为37℃,最佳IPTG终浓度为0.2mmol/L,最佳诱导时间为5小时,目的蛋白的表达量最高可达到菌体总蛋白的32.11%。