第一部分 用ESR检测兔心肌缺血再灌注损伤时血液中一氧化氮的动态变化 目的：建立用电子顺磁共振（ESR）技术，直接测定血液中NO含量的变化。 从而为心肌缺血再灌注损伤时，NO的作用提供直接的证据。此研究旨在观 察体内和体外应用捕捉剂两种方法的作用。 实验1 将捕捉剂注入体内捕捉NO的方法 方法：用戊巴比妥钠（40mg/kg）静脉注射将兔麻醉后，将DETC用生理盐 水以 500mg／kg溶解，硫酸亚铁500mg／kg，加柠檬酸钠 250mg／kg，同时、分 别于腹腔和皮下注射，标本采集时间点取静脉血1ml，以备测NO。 标本采集时间 动物麻醉后，每间隔10mm，共120min，取血1ml， 以备测NO。 结果：在注入捕捉剂后，20－40分钟血液中可见ESR信号，其中在30分钟 时信号最强。在40分钟后，便没有信号。考虑为捕捉剂注入后，由于代谢 的作用，使捕捉剂不断分解，捕捉能力不断下降，最后捕捉能力消失。 结论：此方法不能反映心肌缺血再灌注时NO的动态变化，弃之不用。 实验2 捕捉剂在体外捕捉NO的方法 方法：用戊巴比妥钠（40mg／kg）静脉注射将兔麻醉后，DETC用生理盐水配 成6mmol／L浓度。硫酸亚铁用生理盐水配成3mmol／L浓度。 4 解放军军医进修学院博士论文 标本采集时间点（同实验二）取血 lml以后，立即分别注入 DETC和硫酸亚 铁 20ul，摇匀。37C温水浴 10－15min。加入乙酸乙酯 0 4ml，混匀。以 二，2000／mln离心 10min，定量抽提上清液，用 ESR测检NO。 结果：此方法检测出不同时间点NO的ESR信号稳定。 结论：能反映心肌缺血再灌注时NO的动态变化，敌用此方法进行实验。 实验3 用ESR方法检测兔心肌缺血再灌注损伤时血液中NO的动态变化 方法：用新西兰大白兔5只，结扎前降支制成心肌缺血一再灌注模型，多 导生理仪记录左心室最大上升速率u川tmx人分别于缺血前、缺血 5lin、 10mln，再灌汪 smln、10mln、30mln、60mln、90mln、120mln各时点取静 脉血lml，用体外捕捉剂的方法，在电子自旋共振仪记录NO波谱，测定NO 水平。 结果：在再灌注 srnm（23 4土4 snun）、120mln（21士18mm）时，NO浓 度明显高于缺血前（12 0土0 SItllYI），P＜0 001。再灌注 10＜ill时恢复到缺血 前水平，再灌注 30rmn开始逐渐上升，120mln达到最高＊心肌收缩功能 dpdt max在缺血 smln时Q967土315 3 Wg／s）已经开始受损，与缺血前6 i295 6fnlnHgiS）比较P＜0 001，但是在再灌注5＜II时Q InmHg／s）明显低于缺血 snun时臼967土315 3 MsL P＝0 of。在再灌 注第 snun以后，至实验结束 dp／d max未见恢复。 结论：用ESR方法检测兔心肌缺血再灌注损伤时血液中NO的动态变化显示 在心肌缺血再灌注 smln时，NO明显升高而心肌收缩功能dp川t maX下降。 小结 1，本研究证实体外捕捉剂的方法检测出NO的ESR信号稳定，在体外 进行，安全简捷。能反映心肌缺血再灌注时NO的动态变化，为今后进一步 研究NO的作用和临床研究打下了基础。目前尚见到用ESR方法测心肌缺血 5 解放军军医进修学院博土论文再灌注损伤时血液中NO含量变化的报道。 2，本研究在再灌注smin时，血液中NO的浓度有明显上升，而心肌收缩力有明显下降，提示NO的升高可能是心肌顿抑的相关因素之一。而再灌注后期NO浓度的升高，其机制和作用有待于进一步探讨。第二部分一氧化氮在重复、可逆性心肌缺 羹注所造成的心肌顿抑 细胞凋亡中的作用实验二一旬oD区在重复、可逆性心肌戳血——再羹过oH囱成的心肌顿抑中的作用目的：了解重复、可逆性心肌缺血——再灌注所造成的心肌顿抑时，血液中NO的变化规律及与心功能的关系，并采取促进或抑制NO的干预方法，观察NO对心功能的影响。方法：健康新西兰兔15只，购自本院实验动物中心，体重2．4七．gKg，雌雄兼用。随机分为3组（每组5只）：第一组为对照组，第H组在静脉内注射NO合成底物卜精氨酸（Ltrg组L第三组在静脉内注射N0s抑制剂卜硝基－精氨酸（LWNA，L－vAIA组人用戊巴比妥钠N0ds八g）静脉注射将兔麻醉后，生理记录仪上记录左心室最大上升速率加／dt。ax。结扎前降支制成心肌缺血——再灌注模型，将实验动物缺血10luin，共三次