目的 本实验设计细菌16S rDNA通用引物和牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis，Pg)的特异引物扩增颊粘膜和龈下菌斑中的全细菌和Pg，通过琼脂糖凝胶电泳检测颊粘膜和龈下菌斑中Pg，证实Pg在颊粘膜中存在及分析其与牙周炎发生发展的关系。 方法 1．样本的选择：选择临床口腔健康，年龄在25-50岁之间，无全身系统性疾病，近3个月未服用抗菌素，无吸烟史样本40例；选择诊断为慢性牙周炎，年龄在25-50岁之间，未接受过牙周治疗，无全身系统性疾病，近3个月未服用抗菌素，无吸烟史样本39例。 2．检查临床牙周状况：记录受试牙的菌斑指数(Plaque Index，PLI)、龈沟出血指数(Sulcus Bleeding Index，SBI)、牙齿松动度、牙槽骨吸收度及探诊深度(Probing Depth，PD)。 3．样本采集：用无菌软毛刷刮取双颊粘膜上皮细胞，用无菌牙签取第一磨牙牙周袋内的龈下菌斑分别悬浮于1.0毫升PBS缓冲液中冷冻保存(-75℃)备检。 4．DNA的提取及浓度测定：酚-氯仿法提取颊粘膜和龈下菌斑全细菌DNA，并进行DNA定量分析。 5．统计学分析：采用SPSS11.5统计软件分析牙周临床指标之间的相关关系及全细菌DNA浓度在龈下菌斑和颊粘膜的差异。 6．PCR扩增：设计16S rDNA通用引物和Pg的特异引物，进行扩增，1.5％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。 7．Pg特异引物扩增后在预期片段上出现条带为阳性，否则为阴性。用电泳凝胶成像分析软件分析各电泳条带的积分密度值，用下列公式计算Pg相对含量：Pg相对含量=Pg特异引物积分密度/细菌通用引物积分密度。 8．采用SPSS11.5统计软件分析Pg在颊粘膜和龈下菌斑的检出率及Pg相对含量与各牙周临床指标间的相关关系。结果 1.牙周临床指标间有着不同程度的直线相关关系。PU、SBI、牙齿松动度与探诊深度呈中度正相关关系(p<0.01，r== 0.528，0.587，0.424)，随着PU、SBI、牙齿松动度的减少，探诊深度降低。牙槽骨吸收与牙齿松动度呈高度相关关系(P<0.02，r== 0.723)。 2.牙周健康组中酿下菌斑和颊粘膜的DNA浓度分别是36.58林扩血和24 .5林群ml，牙周炎组中酿下菌斑和颊粘膜的DNA浓度分别是41 .26卜岁nil和26.39林岁而。尽管组内颊粘膜的DNA浓度低于眼下菌斑的浓度，但是无统计学差异。此外两组眼下菌斑、颊粘膜间DNA浓度差异均无统计学意义。 3.在40个牙周健康组样本中，巧个眼下菌斑样本，13个颊粘膜样本检测到Pg，阳性率分别为37.5%，犯.5%。而在39个牙周炎患者组中，27个眼下菌斑样本，18个颊粘膜样本检测到Pg，阳性率分别为69.23%和46.巧%。齿尺下菌斑的阳性率牙周炎组高于牙周健康组，两者的差异有意义(才=7 .98)，牙周炎组的眼下菌斑的阳性率高于颊粘膜，两者的差异有意义(xZ二4.25)，其余各组间的阳性率无统计学差异。 4.在相对含量上，牙周健康组Pg在酿下菌斑和颊粘膜的含量分别为23 .93%和22.3%，牙周炎组Pg在眼下菌斑和颊粘膜的含量分别为32.16%和25.57%。采用配对t检验统计分析，牙周健康组眼下菌斑和颊粘膜中Pg的相对含量无差别(t二0.26，P>0.05);牙周炎组酿下菌斑和颊粘膜中Pg的相对含量有差别，眼下菌斑中Pg的相对含量高于颊粘膜(t二2.655，P<0.05)。采用独立样本t检验分析，颊粘膜中飞相对含量在牙周健康组和牙周炎组间无差别(t二0.85，P>0.05)，眼下菌斑中Pg相对含量在牙周健康组和牙周炎组间有统计学差别，牙周炎组酿下菌斑Pg的相对含量高于牙周健康组眼下菌斑中Pg的相对含量(t二2.巧，P<0.05)。 5.在牙周健康组，眼下菌斑飞的相对含量与PD有相关关系;牙周炎组，齿昆下菌斑Pg的相对含量与Pll、SBI、松动度呈中度相关关系，与探诊深度呈高度相关关系(r二0.839)，颊粘膜Pg的相对含量与探诊深度为中度相关关系，同时酿下菌斑和颊粘膜间也有相关关系。结论 1.本研究分析显示不论是颊粘膜还是眼下菌斑、临床健康和病变部位都存在大量细菌，且无量的差别，只是不同部位，不同牙周状态，细菌的菌种不同和各菌间的比例发生了变化。 2.本实验表明设计细菌165 rDNA通用引物和飞特异引物进行PCR扩增检测牙周微生物是有效、可行的方法。 3.Pg与慢性牙周炎密切相关，是一种重要的牙周可疑致病菌。 4 .Pg可在健康人群检出，又不引起疾病的发生，提示了Pg可能是口腔内固有菌群之一。 5.Pg在颊粘膜的检出，证实Pg能粘附和侵袭口腔上皮细胞。