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呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)为副粘病毒科肺炎病毒属,有包膜的非节段性单股负链RNA病毒,是引起下呼吸道感染最重要的病原体之一。RSV感染易导致毛细支气管炎、肺炎、慢性阻塞性肺炎等疾病,主要影响婴幼儿、老人及免疫缺陷的成人,具有极高的发病率和死亡率。到目前为止,尚无安全有效的疫苗可预防RSV感染。因此,建立简单、快速、灵敏的RSV检测方法对于疾病的早期诊断、治疗及预防控制均具有非常重要的研究意义。此外,研究RSV与宿主细胞之间的相互作用,对于寻求新的药物靶点,开发RSV治疗药物也具有十分重要的研究意义。本文将金纳米材料引入传统的免疫分析,结合信号放大技术,建立了新型的RSV及其细胞膜受体免疫分析方法。具体的研究内容如下：1、基于金纳米颗粒的RSV免疫分析1)以金纳米颗粒(AuNPs)作为载体,建立了一种信号放大的RSV免疫新方法。柠檬酸包被的负电AuNPs通过静电吸附与抗体和碱性磷酸酶(ALP)结合,制备了双标记AuNPs复合物。另外,通过生物素-亲和素的识别作用,将抗体修饰到磁微米表面,制备了免疫磁珠。在检测过程中,免疫磁珠、病毒和双标记AuNPs形成三明治结构,通过ALP催化底物显色实现了对病毒的分析,检测范围为0.5-80pg/mL。与传统的免疫分析方法相比,AuNPs可负载多个酶分子,增强了检测信号,提高了检测灵敏度,有望进一步用于其他病原体的临床诊断及治疗情况的监测。2)以AuNPs作为信号报告分子,结合双重信号放大技术构建了一种高灵敏的RSV等离子免疫分析方法。三磷酸腺苷(ATP)带有负电荷,可使正电AuNPs聚集；而在ALP作用下,ATP可脱磷酸化为不带电荷的腺苷分子,不诱导AuNPs聚集,即ALP可促使AuNPs分散。基于此设计了一种新型的等离子免疫方法,同时,引入两种信号放大方式,利用磁微米实现酶的多标记并利用金属离子增强酶催化反应,显著增强了检测信号。该方法的线性范围为0.1-30 pg/mL,检测限达O.02 pg/mL,与传统方法相比,灵敏度得到进一步提高,具有潜在应用价值。2、金纳米颗粒放大的RSV宿主细胞膜受体原位免疫分析研究利用金纳米放大技术,对宿主细胞表面Toll样受体(TLR)进行原位免疫分析。RSV感染宿主细胞时,TLR可识别并结合相关配体,激活下游信号传导,诱发一系列级联反应,诱导炎症反应并刺激TLR受体表达。以宿主细胞作为传感元件,利用抗原-抗体特异性识别反应分析TLR含量的变化,并研究其与RSV活力之间的关系。结果表明HEp-2细胞的TLR4表达量与RSV的感染复数(MOI)值之间不存在明显的线性关系。由于细胞对外界刺激具有高度敏感性,细胞膜受体原位免疫分析研究可观察RSV与宿主细胞间的相互作用。综上,本论文成功将金纳米材料与传统的免疫分析结合,建立了RSV及其细胞膜受体免疫分析新方法。采用信号放大技术实现了检测灵敏度的提高,扩展了金纳米材料在免疫分析中的应用,同时将细胞作为传感单元对膜受体进行原位免疫分析,为病原微生物与宿主之间相互作用的研究提供了新的思路。