利奈唑胺耐药肠球菌的耐药传播机制研究及感染危险因素调查

来源 :重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lingqiuyi
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目的:ABC转运蛋白OptrA介导恶唑烷酮类药物(利奈唑胺和替地唑胺)和酰胺醇类(氯霉素和氟苯尼考)耐药。根据课题现有的研究基础,我们推测耐药基因的水平转移可能是导致optrA基因高携带率的重要原因,因此本研究对optrA基因传播的机制展开研究。随后探讨2014年到2018年我院利奈唑胺耐药粪肠球菌感染的危险因素。方法:1.本研究中采用S1-PFGE和Southern-blot对44株利奈唑胺耐药的粪肠球菌中的optrA进行基因定位(染色体或质粒上)。采用滤膜法接合转移试验判断耐药基因是否能水平转移;再将接合子中的质粒进行复制子分型。2.将细菌全基因组提取,使用the Illumina MiSeq platform和SeqMan Pro进行测序并组装片段。基因预测及注释则使用GeneMarkS,RAST,ORF Finder和BLAST进行补充验证。再通过SnapGene绘图对多个类似质粒进行比较。3.采用病例-对照回顾性分析对我院2014年至2018年分离的利奈唑胺耐药粪肠球菌(MIC≥8mg/L)进行感染危险因素调查。结果:1.脉冲场凝胶电泳和DNA杂交显示有26株(59%)耐药菌携带的optrA位于质粒上,optrA存在于染色体上的有18株(41%)。质粒接合实验表明,optrA位于质粒上的26株耐药菌中有88.5%(23/26)成功转移,而在染色体(0/18)中的optrA均未发生转移。质粒分型试验表明,rep9型质粒(pCF10原型,即性信息素应答质粒)占主导地位(18/23,78%)。2.P10748的质粒测序表明,在质粒pEF10748中存在耐药基因(optrA和fexA)和多个性信息素反应基因。在携带optrA的分离株中,也检测到三个关键的性信息素应答基因(prgA,prgB和prgC)。最后性信息素诱导聚集试验显示,可检测到大多数菌株出现不同程度的凝集。3.2014年至2018年我院共检出肠球菌1902株,利奈唑胺耐药株共91株,约占4.8%。从外院转入,高龄,恶性肿瘤,气管插管,氟喹诺酮类抗菌药物的使用是LRE感染的独立危险因素。结论:1.optrA是粪肠球菌对利奈唑胺耐药最主要的耐药机制。2.optrA在粪肠球菌中介导的利奈唑胺耐药可以通过性信息素质粒转移而广泛传播。3.年龄,外院转入,恶性肿瘤,气管插管和抗生素先前治疗是LRE感染的独立危险因素。
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