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本文选用DDRT-PCR和RAP-PCR两种经典技术来筛选体外短期扩增培养CD34+造血干/祖细胞的差异表达基因。在DDRT-PCR实验中,选用3个锚定引物和8个随机引物进行排列组合,得到8张具有代表性的RNA指纹图谱,并且切割了30个差异片段作为候选基因进行PCR再扩增、胶回收以及克隆实验。通过测序鉴定出5个基因,分别是:RAN、GallusmRNA、3BACRP11-615P1、RP11-433N2和RP1-10C16。对于RAP-PCR实验,选用8个随机引物对体外培养前后的CD34+细胞进行差异基因对比研究,得到3张RNA指纹图谱,回收了7条差异片段,经过测序和基因库同源性搜索,成功鉴定出一个功能未知的基因,DC24。
为了进一步证实实验结果的可靠性,对RAN和DC24基因进行半定量RT-PCR实验验证。半定量结果显示,经过静态和动态体系培养后的CD34+细胞内RAN基因的表达水平显著提高,分别是未培养的1.521和3.978倍;DC24基因的表达水平分别是未培养的2.374和14.275倍。以上结果表明RAN和DC24基因在CD34+细胞体外增殖过程中可能发挥重要作用。