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本研究通过真核表达系统表达了重组鸡白细胞介素-2(IL-2),观察其表达动态、保存条件,研究了作为免疫增强剂与法氏囊灭活苗联合应用的效果和对柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡免疫系统的影响。分四个实验。 实验一 重组鸡白细胞介素-2的真核表达及表达动态:用重组穿梭质粒pSV·3PORTⅠ转染COS-7细胞瞬时表达重组鸡IL-2,以淋巴细胞增殖试验检测表达产物IL-2生物学活性及表达动态。结果表明:表达产物具有IL-2生物学活性,能使活化的淋巴细胞增殖,转染后在72 hr IL-2的活性开始升高,在96 hr达到最高。 实验二 重组鸡白细胞介素-2的保存条件:在不同温度下放置不同时间并检测其生物学活性。结果表明:在-20℃能保存较长时间并保持较高的生物学活性,可达7个月。 实验三 重组鸡白细胞介素-2作为免疫增强剂与法氏囊灭活苗联合使用的效果:试验设对照组和IBDV灭活苗接种组及IBDV灭活苗加IL-2组,对接种后鸡脾淋巴细胞淋转水平及攻毒后法氏囊病理变化进行比较,结果表明:加重组鸡IL-2能增强法氏囊灭活苗的免疫保护作用,淋转水平大幅度提高,病理变化减少率达20%。 实验四 重组鸡白细胞介素-2对柔嫩艾美耳球虫感染雏鸡细胞免疫的影响。试验设对照组、不同剂量卵囊感染组和不同剂量卵囊感染加IL-2组,在首次感染的基础上攻虫,对首次感染后和攻虫后不同时间的盲肠扁桃体和脾淋巴细胞的淋转水平和IL-2诱生活性进行检测,同时结合盲肠病变记分和粪便卵囊记数对结果进行分析。结果表明,首次感染后,单纯感染组盲肠扁桃体淋巴细胞淋转水平持续受抑制。各卵囊感染组脾淋巴细胞淋转水平在第4天均下降。1、2万卵囊感染组盲肠扁桃体淋巴细胞在感染后第4天(裂殖生殖阶段)能诱导产生较高水平的IL-2,随后产生IL-2能力不如对照组。1万组除第6天外,2、5万组除第4天外,脾淋巴细胞IL-2诱生活性均低于对照组。 辛宏构 丞用渴白翩回介承o作为免疫均强剂的研究感染的同时注射IL毛使1、人3万卯羹感染组盲肠扁桃体淋转水平分别在第4、6、9天高于单纯感染组:使*2万卵羹感染组脾淋巴细胞淋转水平明显升高;任盲肠扁桃体淋巴细胞产生IL·2的堕体水平高于卵羹感染组和对照组;使】万卵羹感染组腴淋巴细胞产生o 的能力稍增强。攻虫后不同感染组盲肠扁桃体和脾淋转水平均出现下降趋势。盲肠扁桃体淋巴细胞!L-2 $生活性在第耳天高于对照组,而第9天较仇 脾淋巴细胞IL-2诱生活性在第一天下降,第9天升高.加tuZ后能提高盲祸扁桃体淋巴细胞淋转水平,但不显示剂坦的差异性:脾淋巴细胞淋转水平高于单纯感染组,第9天高于对照组。盲肠扁桃体淋巴细胞IL-2 f生在攻虫后第4天后增强,高于对照组:ILZ对脾淋巴细胞IL.2诱生活性没有显示增强作用。本实验结果说明:1.加入重组鸡几工可以使首次感染和攻虫后1万、2万卵羹感染组的病变记分和粪便中卵囊排出量明显降低。2.球虫感染雏鸡后引起脾和盲肠扁桃体淋巴细胞免疫抑制,随感染剂量的加大,免疫抑制程度加深。3.重组IL.2能提高首次感染盲肠扁桃体和脾淋巴细胞淋转水平,提高首次感染盲肠扁桃体1卜2诱生活性:从而改善球虫首次感染引起的脾和盲肠扁桃体免疫抑制。4.重组IL-2能提高攻虫后盲肠扁桃体和脾淋巴细胞淋转水平,对攻虫有免疫保护作用。