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研究目的：通过培养3T3-L1前脂肪细胞,并诱导其分化至成熟,研究游离脂肪酸(FFA)对脂肪细胞糖代谢的影响。通过检测3T3-L1前脂肪细胞分化成熟过程中,细胞内活性氧(ROS)浓度的变化,反应细胞内自由基的变化。研究方法：培养3T3-L1前脂肪细胞,通过IBMX、胰岛素、地塞米松的联合诱导,细胞由梭形转变为大而圆、充满脂滴的脂肪细胞,表明细胞分化成熟。用油红0染色鉴定并比较其形态结构的变化。通过不同的FFA (LPS、EPA、SA、PA)干预成熟脂肪细胞,用MTT法检测细胞不同游离脂肪酸刺激细胞48小时后,脂肪细胞的存活率。同时,用含FFA (LPS、EPA、SA、PA)的DMEM干预成熟脂肪细胞6h、12h、24h、48h时收集培养基,葡萄糖氧化酶法算出各组脂肪细胞的葡萄糖消耗量。检测诱导不同时间脂肪细胞内活性氧浓度的变化。对成熟的脂肪细胞,通过Western blot检测不同时间各组FFA干预后细胞AMPK、GLUT4蛋白含量。研究结果：①诱导分化前的3T3-L1前脂肪细胞,呈梭形,胞浆中无脂滴,表现为成纤维细胞样的形态,细胞生长至接触抑制后,处于生长停滞期；诱导分化第2天,细胞形态变圆,但胞浆中无明显脂滴出现；诱导分化第4天,细胞变大变圆,胞浆中有少量脂滴出现在细胞核周围,油红0染色鉴定可以观察到脂肪细胞胞浆中的脂滴染成红色；第6天时,脂肪细胞进一步变大变圆,小脂滴明显增多,聚集在细胞核周围,开始出现“戒环”样结构；诱导分化第8天,90%以上细胞均分化成熟,更多的脂滴聚集,部分小脂滴相互融合,形成大的脂滴。②含LPS、EPA、SA、PA的培养基作用于成熟脂肪细胞,随着时间的延长,显著抑制脂肪细胞对葡萄糖的吸收(P<0.01)。③3T3-L1前脂肪细胞在诱导的第8天,细胞数目最多,活性最好,诱导从第0天到第8天的过程中,脂肪细胞内活性氧浓度逐渐升高,到第8天达到峰值。继续诱导,随着细胞本身活力的减少,细胞出现老化现象,同时,脂肪细胞内活性氧浓度也逐渐降低。④含LPS、EPA、SA、PA的培养基作用于成熟脂肪细胞,随着时间的延长,脂肪细胞AMPK、GLUT4蛋白含量在减少。结论：脂肪细胞内活性氧浓度的变化可以反映细胞的生存状态,游离脂肪酸可以诱导胰岛素抵抗的分子机制可能是通过胰岛素信号通路激活蛋白激酶(AMPK),进而影响GLUT4的蛋白表达,使脂肪细胞的葡萄糖吸收率减低,影响脂肪细胞的糖代谢。