论文部分内容阅读
目的: 研究探讨5-氟尿嘧啶（5-FU）联合藤黄酸（gambogic acid,GA）对人结直肠癌细胞SW480和HCT116增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。 方法: 体外培养人结肠癌细胞SW480、HCT116和正常人肠上皮细胞（human intestinal epithelial cells,IEC），分别给予不同浓度的5-FU和GA单药或联合用药处理48h，采用CCK-8方法检测细胞增殖；采用中效原理计算联合指数（combination index,CI）明确两药联合的相互作用；应用倒置光学显微镜观察细胞形态；流式细胞术测定细胞凋亡率；Rt-qPCR和Western Blot法分别检测P53、Survivin、胸腺嘧啶核苷酸合成酶（Thymidylate synthase,TS）的mRNA和蛋白表达水平。 结果: 1、与5-FU单药相比，与GA联合用药能够增强5-FU对结直肠癌细胞SW480和HCT116的抑制作用（P＜0.05），且该增效作用随着联合的GA浓度的增加而增强，呈浓度依赖性。 2、不同浓度的5-FU（6.25，12.5，25，50，100，200μM）分别与不同浓度的GA（SW480：0.25，0.5，0.75μM；HCT116：0.25，0.5，0.75，1μM）联合用药48h时，其联合指数CI值均＜1，表明这些浓度的5-FU和GA联合用药具有协同作用。 3、5-FU与GA联合用药对人正常肠上皮细胞IEC的毒性无增加（P＞0.05）。4、对照组SW480和HCT116细胞均为贴壁生长，SW480主要呈条梭状，HCT116主要呈扁平多角形，轮廓清晰，折光性好。GA单药作用48h后，细胞数量稍有减少，细胞间隙稍有扩大。5-FU单药组中，细胞数量明显减少，贴壁不佳，细胞变圆，体积缩小，轮廓不清。5-FU+GA组中，这些变化更为明显。 5、与对照组相比，GA单药作用48h对SW480和HCT116细胞凋亡无影响（P＞0.05）；5-FU单药能够促进两种细胞发生凋亡（P＜0.05）；联合用药能够进一步促进细胞凋亡（P＜0.05）。其中，GA能够进一步增强5-FU对 SW480的促凋亡作用（P＜0.05）；GA无增强5-FU对HCT116的促凋亡作用（P＞0.05）。提示，5-FU+GA协同抑制增殖作用可能部分是通过促进细胞凋亡引起的。 6、与对照组相比，GA单药作用48h后，SW480细胞Survivin mRNA表达下降（P＜0.05）；HCT116细胞P53、Survivin和TS mRNA表达下降（P＜0.05）。5-FU单药下调 SW480细胞 P53、Survivin和 TS的 mRNA水平（P＜0.01）；同时下调HCT116细胞P53和TS的mRNA水平（P＜0.01）。与5-FU或GA单药比较，两药联合进一步下调P53、Survivin和TS的mRNA水平（P＜0.05）。 7、与对照组相比，GA单药作用48h后，SW480细胞Survivin和TS蛋白水平下降（P＜0.05）；HCT116细胞P53蛋白水平上升、Survivin蛋白水平下降（P＜0.01）。5-FU单药下调 SW480细胞 P53、Survivin和 TS蛋白水平（P＜0.01）；同时上调HCT116细胞P53蛋白水平、下调Survivin蛋白水平（P＜0.01）。与5-FU或GA单药比较，两药联合进一步下调SW480细胞P53、Survivin和TS蛋白水平（P＜0.01）；进一步下调HCT116细胞Survivin和TS蛋白水平，且进一步上调HCT116细胞P53蛋白水平（P＜0.01）。 结论: 5-FU与GA联合用药具有协同效应，GA能够增强结肠癌细胞SW480和HCT116对5-FU的化疗敏感性，而不增加5-FU对人正常肠上皮细胞IEC的毒性。其协同效应可能与促进细胞凋亡、调控P53、Survivin和TS mRNA及蛋白表达相关。5-FU与 GA联合用药具有有效性和安全性，也许能为结直肠癌患者提供一种新的治疗方案。