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目的(1)比较动脉血栓患者和正常对照组外周血微小RNA-146b(micro RNA-146b,mi R-146b)、相关炎症因子的水平差异,分析信号转导与转录激活子3(Signal Transducers and Activators of Transcription 3,STAT3)与其相关性,以更深入了解动脉血栓发生机制。(2)研究单核细胞IL-6-STAT3信号传导通路对COX-2(Cyclooxygenase-2)表达和单核-内皮细胞粘附性的影响。(3)探讨mi R-146b表达的调控及其对靶细胞功能的影响。方法(1)应用全自动血液分析仪对103例入选者进行血常规检测;全自动生化分析仪测定血脂、肝肾功能、血糖等指标。(2)采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs);免疫蛋白印迹(Western Blot)法检测磷酸化STAT3(phosphorylated STAT3,p-STAT3)蛋白水平;实时荧光定量聚合酶链反应(Real Time-q PCR)法检测mi R-146b表达量。(3)采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)法检测动脉血栓组和正常对组血浆白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-a(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)和白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)及COX-2的水平。(4)体外培养人单核细胞株(THP-1)、人主动脉内皮细胞株(HAECs),采用慢病毒感染法建立高表达和低表达mi R-146b单核细胞系,Real Time-q PCR检测THP-1细胞COX-2 m RNA的表达,Western Blot检测COX-2和p-STAT3蛋白含量;荧光显微镜下细胞计数法检测慢病毒感染后单核-内皮细胞粘附性的变化。结果(1)与正常对照组相比,动脉血栓患者血浆IL-6、TNF-a、IL-1β及COX-2水平均较对照组显著增加;PBMC中STAT3蛋白磷酸化水平显著上调(P<0.01);mi R-146b表达水平较正常对照组下降(P<0.01),其中,急性脑梗组较急性心梗组下降更为显著。(2)使用IL-6刺激THP-1细胞,可在短时间内激活STAT3的磷酸化、显著上调COX-2 m RNA及蛋白水平,且具有时效性;同时,单核细胞向内皮细胞的粘附明显增加。应用STAT3磷酸化及二聚体化特异性抑制剂S3I-201预处理THP-1细胞后,COX-2 m RNA、蛋白的表达量显著下降(P<0.01),IL-6引起的单核细胞粘附数也明显减少(P<0.05)。(3)THP-1细胞mi R-146b表达量在IL-6刺激后显著增加(P<0.05);与阴性对照组相比,高表达mi R-146b组THP-1细胞COX-2 m RNA/蛋白表达量均明显下降,内皮细胞上粘附的单核细胞数减少(P均<0.05);而低表达mi R-146b组细胞COX-2水平及单核细胞粘附数均显著增加(P<0.05~P<0.001)。结论(1)动脉血栓患者外周血IL-6水平、STAT3磷酸化及COX-2表达量均明显增加,mi R-146b的表达水平显著下降,提示动脉血栓形成中存在IL-6-STAT3信号通路,mi R-146b与动脉血栓性疾病的发生相关,有望作为一个生物标志物用于血栓性疾病的预防和治疗。(2)IL-6能够引起STAT3磷酸化,上调单核细胞COX-2表达、促进单核细胞向血管内皮细胞的粘附,表明炎症在血栓性疾病的的形成中起重要作用。(3)在不同mi R-146b表达水平的单核细胞中,COX-2 m RNA、蛋白表达及血管内皮细胞粘附的单核细胞数出现明显变化,呈现出负性相关现象,提示mi R-146b在动脉血栓的形成过程中可能起负性调控作用。