论文部分内容阅读
目的:本研究试图探讨桔梗皂甙D对PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法:体外培养大鼠胸大动脉血管平滑肌细胞(A7r5细胞)。用CCK-8法检测评估桔梗皂甙D以及MAPKs抑制剂(U0126/SB203580/SP600125)对PDGF-BB诱导的VSMCs细胞活力及增殖抑制情况。用流式细胞技术检测桔梗皂甙D对PDGF-BB诱导的VSMCs的细胞周期分布的影响,并用RT-PCR检测Cylin A、Cyclin B1、Cyclin D1、Cyclin E、CDK1、CDK2、CDK4的m RNA表达水平。用Western-Blot检测pERK1/2、ERK1/2、p-p38 MAPK、p38 MAPK、p-JNK、JNK的蛋白表达水平。结果:(1)PDGF-BB对VSMCs增殖的影响:细胞处理36~60小时后,与空白对照组比较,PDGF-BB在浓度为20、30、40ng/ml诱导后细胞活力显著增高(P<0.05),且20ng/ml组与30、40ng/ml组比较,无显著差异(P>0.05)。(2)PD对PDGF-BB诱导的VSMCs增殖的影响:细胞处理24~72小时后,与PDGFBB 20ng/ml组相比,无细胞毒性的桔梗皂甙D 4μg/ml+PDGF-BB 20ng/ml组的细胞活力显著降低(P<0.05),桔梗皂甙D对PDGF-BB 20ng/ml诱导的VSMCs的增殖抑制效应呈浓度和时间依赖性;桔梗皂甙D能将PDGF-BB诱导的细胞阻滞于G1/G0期和G2/M期,伴随相应的Cyclins及CDKs的m RNA表达降低。(3)桔梗皂甙D对PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞的ERK1/2、P38、JNK磷酸化有抑制作用。(4)PD对PDGF-BB诱导的VSMCs增殖的影响与MAPK通路关系:与PDGF-BB20ng/ml组相比,(U0126/SB203580/SP600125)20μM+PDGF-BB 20ng/ml组的细胞活力降低(P<0.01);(U0126/SB203580/SP600125)20μM+桔梗皂甙D4μg/ml+PDGF-BB 20ng/ml组与(U0126/SB203580/SP600125)20μM+PDGF-BB20ng/ml组相比,细胞活力无差异(P>0.05)。结论:桔梗皂甙D具有抑制PDGF-BB诱导的VSMCs增殖的能力,其分子机制可能通过调节周期蛋白及周期蛋白依赖激酶的表达,将细胞阻滞于G1/G0期和G2/M期;并且与ERK1/2、p38 MAPK、JNK的去磷酸化相关。