CUEDC2(CUE domain containing protein2)是一个由287个氨基酸组成、功能尚未阐明的蛋白质,(GeneBank Number: NM_024040),由本实验室首先克隆并表达的蛋白质。结构域分析表明该基因有一个CUE结构域,CUE结构域一般含有40个左右的氨基酸,其广泛分布在真核细胞蛋白质中。在实验室前期的工作中,发现CUEDC2能够通过促进孕激素受体PR的泛素化降解抑制PR的转录活性,进而抑制乳腺癌细胞的生长。后续的工作中,发现 CUEDC2能够与NF-κB通路的激酶IKK结合,并介导磷酸酶复合物GADD34/PP1到IKK复合物灭活IKK,进而达到抑制NF-κB通路激活的作用。　　在进一步的研究中,初步提示CUEDC2能够参与肿瘤细胞(乳腺癌和子宫颈癌)的细胞周期调控。众所周知,肿瘤的发生发展与细胞周期调控异常有着密不可分的关系,尤其是近几年,国外在这方面的研究已经取得了令人振奋的进展,针对细胞周期调控的药物尤其是激酶抑制剂,已经在越来越多的实验室中得到验证并获得突破性进展,初步表明该类药物靶标是确行有效的。因此,深入研究CUEDC2调控肿瘤的细胞周期的作用靶点,及其对乳腺癌发生、发展相互关系的分子机制,将可能为揭示细胞周期检查点调控的分子机制作出贡献,并为乳腺癌的治疗提供重要信息。　　为了更好的研究细胞周期,首先成功建立了细胞周期同步化的方法,利用细胞周期同步化药物Thymidine, Nocodazole将细胞分别同步化在细胞周期的不同时相:G1,S,G2和M期,并用流式细胞术检测同步化效率,结果表明同步化比较成功。此外进一步将细胞同步化到 M期的各个阶段,以便进一步研究CUEDC2在M期的各个阶段中的作用和分子机制分析。　　此外,为了研究 CUEDC2在细胞周期中发挥作用的分子机制,我们先将稳定过表达 CUEDC2的宫颈癌细胞(本实验室已建立好)用Thymidine和Nocodazole这两种药物同步化于不同的细胞周期(G1期和G2/M期),然后用anti-Flag affinity agarose beads( Sigma公司)免疫亲和纯化技术,沉淀Flag-CUEDC2复合物,以表达Flag-vector细胞系作为对照,免疫沉淀复合物再用3×Flag peptide(Sigma公司)从beads上洗脱下来,最后用高灵敏的高解析离子淌度质谱(HDMS)对有差异的条带进行鉴定并最终分析出在细胞周期(G1期和G2/M期)中与CUEDC2可能相互作用的蛋白质,并找出G1期和G2/M期与CUEDC2相互作用的差异蛋白质,在这些筛选到的可能与CUEDC2相互作用的蛋白质中,应用免疫共沉淀技术(Immunoprecipitation)进行体内相互作用的验证,由于验证的这两个蛋白质都是已知的参与细胞期调控的重要蛋白质,国际上对作用机制有明确的报道,因此对下一步揭示CUEDC2在细胞周期中的作用机制提供很好的提示和依据。　　通过本项工作,成功建立了细胞周期同步化的方法,并利用此方法借助质谱技术初步筛选出在细胞周期中(G1期,G2/M期)与CUEDC2能够发生相互作用的蛋白质,一部分是已知的参与细胞周期的蛋白质,为揭示 CUEDC2参与细胞周期调控的作用及其在宫颈癌的发生发展中的功能研究提供了重要线索。此外还包括了一批未知的参与细胞周期的蛋白质,为发现与肿瘤相关的调控基因和分子治疗靶点提供线索。