论文部分内容阅读
目的：目前为止,p53仍然是作用最为广泛和最为重要的抑癌基因.有超过一半的恶性肿瘤(宫颈癌等)中发生有p53的功能失活或者蛋白量降低.作为转录因子,p53能够调控很多基因的表达水平,如p21,Bax等,进而调控细胞在多方面的生物学行为,如增殖,转移,代谢等。深入挖掘调控p53的机制和重建p53蛋白的功能活性,仍然是目前全世界最为关注的课题之一。p53可以通过调控相关基因表达来调控细胞内线粒体数量与代谢活性,但是目前仍然没有足够的证据能够证实线粒体蛋白能够影响p53的状态。而在我们前期研究中,发现线粒体蛋白UQCRC2(QCR2)参与调控了肿瘤细胞的TSA化疗敏感性。QCR2是线粒体氧化磷酸化复合体三的重要组成部分。现在尚未有足够的证据证实QCR2的表达水平与肿瘤发生发展之间的关系。本文主要从我们发现的QCR2对p53蛋白稳定性的调控作用这一方向入手,探索线粒体蛋白QCR2在肿瘤中所扮演的角色。方法：免疫组织化学证实QCR2在多种肿瘤组织中高表达,CCK8细胞活力检测,EDU细胞增殖检测,细胞克隆形成探索QCR2对肿瘤细胞增殖的影响。流式细胞术检测周期检测QCR2对周期的影响。Western Blot证实QCR2调控p53蛋白水平,实时荧光定量PCR法证实QCR2水平对p53的mRNA水平不具有调控作用,蛋白免疫共沉淀方法研究p53的泛素化水平和寻找QCR2的相互作用蛋白以探索QCR2调控p53蛋白水平的机制,质谱鉴定QCR2相互作用蛋白。Nod-Scid小鼠皮下成瘤实验研究QCR2及PHB对肿瘤细胞成瘤能力的影响。结果：QCR2在肺癌组织、肝癌组织、乳腺癌组织、甲状腺癌组织、宫颈癌组织、食管癌组织、前列腺癌组织中的表达量都较相对应的正常组织高。下调QCR2表达后肿瘤细胞发生G0/G1期阻滞,肿瘤细胞增殖变慢。而干扰QCR2后p53及其下游p21的蛋白量呈现明显累积。后期实验证实QCR2能够促进p53泛素化,进而负向调控p53蛋白水平。p21作为p53的下游,也随之变化。经证实,QCR2是通过调控PHB入核及PHB与p53的相互作用来调控p53的蛋白水平的。皮下成瘤实验证明QCR2能够促进肿瘤生长而PHB能够抑制肿瘤生长。而大量宫颈癌标本的免疫组化染色证实QCR2的表达量与p21的表达量成负相关,而PHB的表达量与p21的表达量成正相关。结论：1.作为线粒体复合体三的重要组成蛋白,QCR2在多种肿瘤组织中表达量增高。2.QCR2能够促进p53泛素化,从而负向调控p53的蛋白水平。3.QCR2通过调控其相互作用蛋白PHB与p53的相互作用来实现对p53的调控的。4.QCR2能够促进肿瘤生长,而PHB能够抑制肿瘤生长。