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毛冬青为冬青科冬青属植物毛冬青Ilex pubescens Hook et Arn.的干燥根,广泛分布于我国南方,是常用中药,具有活血通脉、消肿止痛、清热解毒的功效,临床上用于治疗冠心病、血栓闭塞性脉管炎等疾病。 文献报道,毛冬青中主要含有三萜皂苷及苷元,然而,迄今为止,毛冬青药材及其制剂的质量评价仍沿用《中国药典》一九七七年版中毛冬青药材横切面显微鉴别、理化鉴别及比色法测定总黄酮。以上的质量分析方法缺乏专属性,均难以准确控制毛冬青药材及含毛冬青的制剂的质量。为了规范商品毛冬青药材的流通及其制剂生产的质量控制,急需建立特征性和专属性强的质量评价方法控制药材及其制剂的质量。 针对毛冬青的研究现状,本课题从化学成分和质量分析两方面对毛冬青药材进行探索和研究。在化学成分研究的基础上,建立多成分定量及指纹图谱定性的研究方法,以期建立以多指标成分定量结合指纹图谱定性为核心内容的药材质量评价体系。 研究内容包括毛冬青化学成分的系统分离、主要成分的含量测定,药材薄层色谱指纹图谱鉴别研究。研究结果如下: 1.从毛冬青根中分离得到17个单体化合物。已鉴定了其中的13个,包括11个三萜化合物其中3个三萜皂苷元ilexgenin A(MDQ-A)、rotungenic acid(MDQ-R)、rotundic acid(MDQ-S),8个三萜皂苷ilexsaponin A1(MDQ-E)、ilexsaponin B1(MDQ-B)、ilexsaponin B2(MDQ-C)、ziyu-glycosideⅠ(MDQ-J)、ilexoside O(MDQ-K)、3-O-?-D-吡喃葡萄糖ilexgenin B配基28-O-?-D-吡喃葡萄糖苷(MDQ-N)、ilexoside A(MDQ-P)、3-O-?-D-吡喃木糖-19?-羟基乌苏-12-烯-23-醛-28-酸28-O-?-D-吡喃葡萄糖苷(MDQ-Q1);1个木脂素化合物:tortoside A(MDQ-F);1个芳香醚类化合物:1,3,5-三甲氧基苯(MDQ-D)。其中化合物MDQ-Q1为新化合物,化合物MDQ-R、MDQ-S、MDQ-J、MDQ-N、MDQ-D为首次从该植物中分离得到。 应用2D NMR技术,首次对三萜皂苷元ilexgenin A(MDQ-A)和三萜皂苷ilexsaponin A1(MDQ-E)、ilexsaponin B1(MDQ-B)、ilexsaponin B2(MDQ-C)的1H和13C NMR信号进行了全归属。 2.首次建立同时测定毛冬青5种主要化学成分含量的方法。对14批次的毛冬青药材中的ilexoside O、ilexsaponin B2、ilexsaponin A1、ilexsaponin B1和ilexgenin A的含量进行测定,所测结果为14批次的测试样品中,ilexoside O、ilexsaponin B2、ilexsaponin A1、ilexsaponin B1和ilexgenin A的含量范围分别为0.736~3.346 mg/g,0.389~4.434 mg/g,5.800~11.370 mg/g,0.220~4.135 mg/g,1.423~5.866 mg/g。方法学考察表明方法简便可行、重复性好,可用于毛冬青药材的质量监控。 3.研究毛冬青的TLC指纹图谱的测定方法,通过对14批不同采(收)来源的毛冬青药材建立了毛冬青药材的指纹图谱。其中共指认了11个特征色谱峰。与随行对照品进行比对,可确定1号峰、3号峰、5号峰、6号峰、7号峰、9号峰、11号峰分别为ilexoside O、ilexsaponin B2、ilexoside A、ilexsaponin B1、MDQ-L、ilexsaponin A1、ilexgenin A。利用Chromafinger2005指纹图谱解决方案软件将薄层色谱图像转化成轮廓曲线图,并进行相似度评价,结果14批药材的相似度在0.8511~0.9537之间。本文还对毛冬青茎、叶指纹图谱进行了研究,发现茎、叶与毛冬青药材(根)的匹配性较差。利用毛冬青TLC指纹图谱可以区别毛冬青不同部位,可以对毛冬青药材进行质量评价。所建立的方法简便,可行。 本文对毛冬青的化学成分的系统分离研究,丰富了毛冬青化学成分研究方面的内容。质量评价采取多指标成分定量与指纹图谱相结合,多指标成分定量着重体现中药材的个体特性,中药指纹图谱着重体现中药材的整体特性,以多指标成分定量与指纹图谱为核心的药材质量评价体系更好地反映和控制药材的内在质量。本文所建立的质量分析方法简便、可行、重复性好、专属性好,可以为该药的进一步进行质量标准研究及综合开发提供实验参考依据。