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目的：
研究CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在正常肝组织中、肝局灶性结节状增生(FNH)组织中、肝脏不典型腺瘤样增生(AAH)组织中、原发性肝癌(HCC)组织及癌旁组织中的分布特点,并探讨Treg细胞在HCC组织的分布状况与各项临床病理指标之间的关系；评价其在肿瘤的发生和发展中的作用。
方 法
入选标本为正常肝组织组10例、FNH组10例、AAH组10例、HCC组60例(其中男性45例,女性15例；年龄≤60岁46例,＞60岁14例；肿瘤大小≤5cm27例,＞5cm 33例；21例有完整包膜,39例包膜不完整或无包膜；术前检查 AFP者40例,增高24例,正常16例；术前检测HBV-DNA者25例,增高15例,正常10例；取材时有癌旁组织的17例)。采用双重酶标免疫组化染色的方法分别测定各组Treg细胞的表达,采用盲法进行观察,先在低倍镜下观察整张切片,随机选择5个高倍视野(400×)计数阳性细胞,求其平均值,应用SPSS 13.0统计软件采用非参数检验方法Mann-Whitney U法对数据进行检验,测定Treg细胞表达及分布状况,分析其在肝癌中的表达及其意义,以P<0.05为差异有统计学意义,P<0.01为差异有显著统计学意义。
实验结果
1、正常肝组织组及FNH组中均未发现Treg细胞的表达。AAH组中有少量Treg细胞的表达,单个高倍视野平均数为2.20±1.14；HCC组中有Treg细胞的表达,单个高倍视野平均数为6.78±2.16；癌旁组织Treg细胞单个高倍视野平均数为5.19±1.87。
2、Treg细胞的表达在HCC组较AAH组增多,且两组间比较差异有统计学意义(P=0.000)。HCC组Treg细胞的表达较癌旁组织增多,两组间比较差异有统计学意义(P=0.002)。
3、HCC组中年龄大于60岁与小于60岁之间比较、不同性别之间比较及术前AFP正常与升高组比较,Treg细胞的表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。Treg细胞的数目与肿瘤的大小有关,肿瘤直径≤5cm组 Treg 细胞单个高倍视野平均数为6.37±2.10,肿瘤直径＞5cm组 Treg 细胞单个高倍视野平均数为7.12±1.64,两组间比较差异有统计学意义(P=0.028)；包膜完整组Treg细胞单个高倍视野平均数为6.52±2.13,包膜不完整或无包膜组Treg细胞单个高倍视野平均数为6.92±1.88,两组间比较差异有统计学意义(P=0.035)；术前HBV-DNA正常组Treg细胞单个高倍视野平均数为6.14±2.15,术前HBV-DNA≥1×103Copies/ml组 Treg 细胞单个高倍视野平均数为7.36±2.33,两组间比较差异有统计学意义(P=0.007)。
结 论
1、正常肝组织及FNH组织中无CD4+CD25+Treg细胞表达,AAH、HCC及癌旁组织中有CD4+CD25+Treg细胞表达。
2、CD4+CD25+Treg 细胞在肝癌组织中的表达与年龄、性别及术前AFP值无关,与肿瘤的大小、肿瘤包膜及术前HBV-DNA水平有关:大肝癌组织中Treg细胞数量较小肝癌明显增多；无包膜或包膜不完整组中Treg细胞数量较包膜完整组明显增多；术前HBV-DNA水平升高组中Treg细胞数量较HBV-DNA正常组明显增多。
3、Treg细胞的增多有利于肿瘤的发生和发展,在肿瘤免疫中起负调节作用,除去或减少肝癌微环境中的Treg细胞有可能提高肿瘤的免疫治疗效果。