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砂仁是四大南药之一,在广东、海南及云南分布广泛,为历代常用中药,因其药效可靠而著称。本文研究了砂仁活性物质的提取、纯化,优化了砂仁提取方法。并对砂仁粗提物及有机溶剂分部萃取物的抗氧化活性、对细菌真菌等的抑菌功效以及对体外培养人宫颈癌Hela细胞生长的抑制功效进行了研究。主要结果如下:
(1)砂仁活性物质的提取工艺。以水和乙醇为溶剂,以提取温度、提取时间、乙醇浓度和固液比为提取因素,DPPH·清除率为评价标准,在单因素实验的基础上进行四因素三水平的正交试验(L34)。通过极差分析和方差分析结果探讨砂仁提取工艺影响因素的主次关系并优化出最佳的提取条件,结果表明,影响砂仁提取因素的主次顺序是:固液比,提取时间,乙醇浓度和提取温度；最佳提取条件是:采用乙醇作为提取溶剂,提取温度85℃,提取时间1.5h,乙醇浓度60％,固液比1:20。
(2)砂仁提取物的抗氧化功效。砂仁乙醇提取物对自由基有一定的清除能力。在一定的浓度范围内,随着浓度的增加,提取物对自由基的清除能力逐渐增强,呈正相关的量效关系。分别用极性不同的有机溶剂石油醚、乙醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取提取物,测定提取物的自由基清除能力,结果表明,不同萃取相均能不同程度清除DPPH·、超氧阴离子(O2-)、羟自由基(·OH),并具备一定的总抗氧化能力和还原力。对DPPH·的清除能力顺序为:乙醚相(86.39％)>乙酸乙酯相(86.45％)>水相(73.12％)>砂仁提取物(72.96％)>正丁醇相(71.03％)；对超氧阴离子(O2-)的清除能力顺序为:正丁醇相(75.95％)>乙醚相(68.17％)>乙酸乙酯相(65.54％)>乙醇提取物(58.80％)>水相(49.92％)；对自由基(·OH)的抑制能力顺序为:正丁醇相(120.80U/mL)>乙酸乙酯相(117.77U/mL)>乙醚相(106.16 U/mL)>水相(89.09 U/mL)>乙醇提取物(82.51 U/mL)；总抗氧化能力的大小顺序为:正丁醇相(63.24.单位/mL)>乙酸乙酯相(36.80单位/mL)>乙醇提取物(33.08单位/mL)>乙醚相(32.74单位/mL)>水相(31.52单位/mL)；还原力大小顺序为:乙醚相(0.557)>正丁醇相(0.486)>砂仁乙醇提取物(0.386)>乙酸乙酯相(0.355)>水相(0.34.9)。所以,砂仁乙醇提取物的抗氧化活性成分主要存在于正丁醇相和乙酸乙酯相中。
(3)采用MTT法和流式细胞仪检测了砂仁提取物及不同萃取相在体外对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。结果表明,砂仁乙醇提取物和不同萃取相均可抑制Hela细胞的增殖,并呈现剂量效应和时间效应关系。在0.03-0.20mg/mL浓度范围内,对Hela细胞增殖的抑制作用大小顺序为:砂仁乙醇提取物>正丁醇相>乙酸乙酯相。流式细胞仪检测结果表明:正丁醇相和乙酸乙酯相处理的Hela细胞的凋亡峰明显,检测结果与MTT法结果一致。而乙醇提取物处理的Hela细胞的凋亡峰不明显,检测结果与MTT法结果不一致。分析认为:正丁醇相和乙酸乙酯相在Hela细胞生长前期诱导细胞凋亡,而提取物则在Hela细胞生长后期诱导细胞凋亡。
(4)砂仁提取物的抑菌能力。采用砂仁乙醇提取物对常见大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌进行抑菌实验,结果表明,砂仁提取物对这三种菌均无明显的抑菌和杀菌作用。