光感基因活化嗅鞘细胞的体外研究

来源 :中国人民解放军军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ynl007
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:目前细胞移植修复脊髓损伤研究中存在两大不足:一,对脊髓损伤再生微环境中抑制因素的拮抗不够;二,对移植入脊髓内细胞的调控不足。研究表明,即便将细胞移植入脊髓内,脊髓再生微环境中仍存在大量的轴突再生抑制因子。最近的研究发现轴突胞膜上的Nogo受体复合体(NgR/p75NTR/Lingo-1)是发挥抑制轴突再生和髓鞘形成的作用共同通道,亲水的Lingo-1片段(Lingo-1-Fc)可通过对NgR结合位点的竞争,阻碍Lingo-1和NgR的结合,抑制Lingo-1的作用,从而拮抗再生微环境中的抑制因子。另外,细胞移植入损伤脊髓后,尚缺乏对植入体内细胞功能状态的活化及调控。OEG细胞已被广泛的应用于脊髓损伤的基础研究,并显示出了神经保护、穿越疤痕、再髓鞘化,及促进轴突再生的作用。光感基因ChR2能够稳定的表达在神经元细胞内,其为膜阳离子通道蛋白,经波长470nm蓝光刺激后产生钠离子内流引发动作电位,使神经元兴奋。既往研究表明大脑星型细胞可被光感基因调控,能否使用光感基因技术活化OEG细胞,同时使其分泌Lingo-1-Fc片段拮抗再生抑制因子,增强其修复脊髓损伤的作用。本研究试图通过光感基因活化OEG的体外研究探讨此问题,为OEG细胞体内移植后的光基因调控活化,提供科学基础和理论依据,以达到脊髓损伤微环境中促进因素和抑制因素的协调,获得更佳的修复效果。方法:构建光感基因ChR2和大鼠Lingo-1-Fc基因的慢病毒载体,体外转染大鼠OEG细胞,使用RT-PCR、ELISA、细胞内蛋白定位技术验证转染成功,即光感基因ChR2及Lingo-1-Fc蛋白的表达。根据LED闪光电路,自行设计制备LED蓝光光照装置,使用蓝光体外照射刺激OEG细胞,观察光刺激后OEG细胞的生物学反应,重点观察体外OEG细胞经光感基因调控后的存活、增殖、迁徙、分泌等功能的变化情况。采用光刺激后OEG细胞培养的上清液培养人神经母细胞瘤细胞,观察其对神经细胞的营养保护作用。结果:构建的慢病毒载体能够有效、安全、高效的转染OEG细胞,其最佳的转染MOI为10。OEG细胞内能够检测到目的基因的表达和分泌;蓝光LED光源波长为470nm,辐射照度能够达到光感基因调控刺激细胞的条件。与单纯纯化的OEG相比,蓝光刺激后期OEG细胞可以明显的增强其增殖活性,增加了神经营养因子的分泌,增强了OEG细胞的体外迁徙能力,增强了其对神经细胞的营养保护作用。结论: OEG细胞可被光感基因技术调控和活化;体外光刺激增强了OEG细胞的生理功能;光活化的OEG细胞促进了OEG的神经营养因子分泌功能,增强了细胞迁徙和增殖的能力,增强了神经保护作用,为体内移植后OEG的光活化调控提供了科学基础和理论依据。
其他文献
架空输电线路防雷是电力系统防雷工作的重要方面,常用的防雷改进措施有:架设避雷线、安装避雷针、加强线路绝缘、采用差绝缘方式、装设耦合地线或藕合地埋线、升高避雷线减小保
供电系统中恶性误操作事故屡禁不绝,其中变电站误操作事故居多。这些事故的发生,给企业造成了很大的不良影响。同时,也造成了企业社会效益和经济效益的双重损失。文章在此主要介
分析临床工作中所发生护患纠纷的成因是:护理人员未能严格执行护理工作制度;护理人员责任心不强;护理人员的服务态度生硬;护理人员的法制和安全意识薄弱;护理人员不尊重患者的权利
光纤通信以其容量大、抗干扰能力强、衰减小,适合远距离传输大量信息等优势,得到电力通信部门的青睐,成为电力通信的发展方向。文章对光纤通信在电力系统中的应用进行了探讨。
目的探讨蛋白Eya1在乳腺癌细胞增殖中的作用。方法选用乳腺癌细胞系MDA-MB-453 , SK-BR3 , BT474以及MDA-MB-231作为研究对象。首先,在MDA-MB-453,SK-BR3以及BT474细胞系中采
本文简单介绍了台湾青枣的众多优点以及在其栽培、种植过程中需要注意的技术问题,并根据这些问题提供了科学合理的解决方法,以便为该产品的推广提供科学依据。
广州市增城区致明学校是一所特殊教育学校,为特殊儿童少年的生活、学习提供了一个温馨舒适的"非常之家"。笔者有幸参与了此项目,对特殊儿童的特点和需求展开了调研工作,在此基
水资源承载力是衡量一个国家或地区用水安全、发展前景的标准。在分析和总结已有研究成果的基础上,对水资源承载力的内涵、定义以及国内外研究现状和评价方法进行系统的评述,
本文首先探讨了近似计算在静态分析中的应用问题,其次分析了纳米电子技术急需解决的若干关键问题和交互式电子技术应用手册,最后电子技术在时间与频率标准中的应用进行了相关的
随着时代的发展,为了获得更多受众的需求,促使报刊的新闻报道越来越贴近现实生活。而为达到这一目的,流行语和新闻的结合是新闻报道中最常用的一种方式。但由于流行语存在很