本实验为构建和筛选良好的猪乙型脑炎和猪细小病毒的核酸疫苗,并提高核酸疫苗的免疫效果,用重叠PCR法把PPV VP2和JEV E10连接起来,得到重组质粒pcDNA.VE,再设计—对特异性引物扩增IFN-γ并插入载体pcDNA.VE,构建含有PPV VP2基因、JEV E10基因和IFN-γ基因的重组质粒pcDNA.VEI,并使其共同表达。用脂质体将pcDNA.VEI介导入Vero细胞,通过间接免疫荧光法检测目的基因的体外表达,观察细胞绿色荧光。用pcDNA.VEI和不表达IFN-γ的pcDNA.VE分别免疫Balb/c小鼠,同时设立PBS、猪细小病毒灭活疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗和pcDNA3.1空白质粒免疫对照组。共免疫两次,间隔2周检测免疫指标。观测脾淋巴细胞增殖、通过ELISA观测免疫小鼠的抗体水平,并进行T细胞亚群动态监测。结果显示,通过鉴定核酸疫苗的构建达到了预期目标,并可在荧光显微镜下观察到了其转染的Vero细胞。该核酸疫苗能够诱导脾淋巴细胞增殖。ELISA结果显示,与pcDNA.VE和阴性对照组进行比较,pcDNA.VEI所诱导产生的两种抗体都较高。在首免后2周时还不明显,但随后抗体水平逐渐增高,第4周时抗体水平显示出明显增高。pcDNA.VEI组能较稳定的诱导产生T细胞亚群,并检测到CD4+/CD8+比例于首免2周后都高于pcDNA.VE。结果表明：共表达γ干扰素的乙型脑炎病毒与猪细小病毒核酸疫苗构建成功,并能产生特异诱导体液免疫和细胞免疫,在小鼠免疫试验中IFNγ基因在核酸疫苗中发挥了免疫增强效果,为乙脑和猪细小病毒核酸疫苗研究提供了实验依据。