目前世界上有超过5亿人患有慢性肾脏疾病,并且每年超过百万人死于慢性肾脏病导致的心脑血管并发症。所以,目前慢性肾脏病成为继心脑血管病、肿瘤、糖尿病之后又一个威胁人类健康的疾病,从而成为全球性公共卫生问题。肾脏纤维化是慢性肾脏病的共同特征,也是进展至终末期肾病的共同病理过程。所以,研究肾脏纤维化的机制意义重大。miRNA是近年来的研究热点,其中miRNA-9在肿瘤的EMT、组织及器官的纤维化中发挥重要的作用。既往研究显示组织缺氧能够促进细胞EMT,并且能够促进肿瘤的浸润及转移。除此之外,低氧亦在肾脏EMT及纤维化中发挥着举足重轻的作用。那么,miRNA-9在低氧诱导的肾脏纤维化中是否发挥一定的作用?E-cadherin是一种由CDH1基因编码的细胞表面糖蛋白。其能够调节钙依赖的细胞间连接,并且参与细胞的分化及形态改变。但是其在肾脏纤维化中研究较少。通过生物信息学预测,我们发现CDH1可能是miRNA-9的靶基因之一。那么,E-cadherin是否参与低氧诱导的肾脏纤维化呢?它与miRNA-9存在着怎样的关系呢?对上述问题目前仍不清楚。【目的】1.研究HK-2细胞在低氧刺激后,miRNA-9、E-cadherin、纤维化分子的表达情况;2.研究miRNA-9在HK-2细胞表型转换中的作用;3.研究E-cadherin在HK-2细胞表型转换中的作用;4.研究miRNA-9与E-cadherin之间的关系;5.研究miRNA-9、E-cadherin在大鼠UUO模型及IgA肾病中的表达。【方法】1.HK-2细胞在低氧孵箱中培养不同时间,通过q RT-PCR和Western blot方法,检测miRNA-9、E-cadherin和纤维化分子的表达;2.用miRNA-9 mimic和inhibitor分别进行转染,使miRNA-9过表达和抑制,观察其在HK-2细胞表型转换中的作用;3.用E-cadherin慢病毒进行转染建立过表达细胞系,并用si RNA转染建立干扰细胞系,观察转染后其在HK-2细胞表型转换中的作用;4.数据库预测miRNA-9的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因证实;5.建立大鼠UUO模型,检测miRNA-9、E-cadherin在其中的表达;收集临床IgA肾病病人肾活检组织、肾癌病人癌旁肾组织,并检测miRNA-9、E-cadherin在其中的表达。【结果】1.HK-2细胞置于1%O2的孵箱中分别培养0 h、12 h、24 h、48 h、72 h,qRT-PCR及Western blot方法检测miRNA-9、E-cadherin、纤维化分子的表达,结果显示:miRNA-9、纤维化分子的表达随培养时间的延长逐渐升高,E-cadherin逐渐降低。说明低氧刺激可促进HK-2细胞纤维化。2.miRNA-9 mimic、inhibitor分别进行转染,qRT-PCR及Western blot方法检测miRNA-9、E-cadherin、纤维化分子的表达,结果显示:miRNA-9 mimic转染后,纤维化分子的表达增加,E-cadherin表达减少;miRNA-9 inhibitor转染后,E-cadherin表达增加,纤维化分子的表达减少。说明miRNA-9可促进HK-2细胞向间充质细胞转化。3.E-cadherin过表达慢病毒转染后,qRT-PCR及Western blot方法检测E-cadherin、及纤维化分子的表达,结果显示:E-cadherin的表达升高,纤维化分子的表达降低;si RNA转染后,q RT-PCR及Western blot方法检测E-cadherin、纤维化分子的表达,结果提示:E-cadherin的表达减少,纤维化分子的表达增加。说明E-cadherin可抑制HK-2细胞向间充质细胞转化。4.Target Scan软件预测发现CDH1可能为miRNA-9的下游靶基因之一,双荧光素酶报告基因证实miRNA-9可以与CDH1的3’UTR相结合。5.在大鼠UUO模型中,miRNA-9的表达明显升高,E-cadherin的表达显著下降与癌旁正常肾组织相比,Ig A肾病病人活检肾组织中,miRNA-9的表达明显增加E-cadherin的表达显著减少。【结论】通过研究低氧刺激后的HK-2细胞中、UUO模型中、Ig A肾病病人中miRNA-9、E-cadherin的表达,我们发现低氧刺激后HK-2细胞、UUO模型、Ig A肾病病人活检样本中miRNA-9的表达增加,E-cadherin的表达减少。并且验证miRNA-9通过调控下游E-cadherin的表达而发挥作用,从而进一步调控肾脏纤维化。