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目的:1.分离纯化裂果薯皂苷,建立裂果薯甾体皂苷化合物的分离制备方法,并考察其对人肝癌细胞的抑制作用,确证裂果薯抗肝癌的具体成分。2.裂果薯甾体皂苷化合物Ⅰ（SPHSⅠ）和甾体皂苷化合物Ⅱ（SPHSⅡ）诱导人肝癌HepG2和SMMC-7721细胞凋亡的作用并探讨其作用机制。方法:1.80%乙醇常压提取裂果薯块茎,石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取醇提物,正丁醇萃取部位经D101大孔吸附树脂富集皂苷,50%-95%的乙醇梯度洗脱;硅胶柱和Sephadex LH-20柱对75%乙醇组分进行分离纯化,得到裂果薯甾体皂苷化合物,采用NMR技术进行结构鉴定。同时采用MTT法观察各组分对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。2.MTT法和集落形成法观察SPHSⅠ和SPHSⅡ对HepG2和SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。Hoechst 33258法观察SPHSⅠ和SPHSⅡ对HepG2和SMMC-7721细胞凋亡形态的影响。透射电镜观察SPHSⅠ和SPHSⅡ对HepG2和SMMC-7721细胞的细胞超微结构形态特征。3.采用流式细胞仪检测SPHSⅠ和SPHSⅡ对HepG2和SMMC-7721细胞细胞凋亡、细胞周期、细胞内活性氧（ROS）水平和线粒体膜电位（MMP）的影响,N-乙酰半胱氨酸（NAC）处理后再次测定上述指标。Western blot（WB）法检测SPHSⅠ和SPHSⅡ对Hep G2和SMMC-7721细胞凋亡相关蛋白和MAPK信号通路蛋白表达的影响。结果:1.裂果薯醇提物、正丁醇部位、75%乙醇和95%乙醇组分能抑制SMMC-7721细胞的增殖,IC50分别为92.35、56.26、5.69、5.49μg/mL。75%乙醇组分经反复分离纯化,得到裂果薯皂苷Ⅰ123.4 mg、裂果薯皂苷Ⅱ203.8 mg和豆甾醇苷546.8 mg;经1H NMR、13C NMR分析,其结构分别被确定为:（25S）-spirost-5-en-3β-yl-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-O-[O-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-α-L-rhamnopyranosyl-（1→3）]-β-D-glucopyranoside、Yamogenin3-0-[α-L-rhamnopyranosyl-（1→3）]-[α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）]-β-D-glucopyranoside和stigmasterol 3-O-β-D-gIucopyranoside。2.SPHSⅠ显著抑制HepG2和SMMC-7721细胞的增殖,其24 h的IC50为0.91和1.00μM;SPHSⅡ显著抑制HepG2和SMMC-7721细胞的增殖,其24 h的IC50为0.57和0.56μM。集落形成实验结果显示,SPHSⅠ和SPHSⅡ显著抑制HepG2和SMMC-7721细胞的增殖,呈浓度依赖性（P<0.001）。Hoechst 33258染色结果显示,空白对照组细胞核形态清晰完整,呈淡蓝色荧光;给药组可观察到明显的细胞形态学变化,如形成凋亡小体等凋亡特征。透射电镜结果显示,空白对照组细胞膜和细胞器结构完整;而给药组细胞缩小,染色质凝聚加深边集于细胞膜及染色体固缩,产生大量的的凋亡小体等凋亡特征。流式凋亡实验结果显示,SPHSⅠ和SPHSⅡ显著诱导HepG2和SMMC-7721细胞凋亡,提高细胞总凋亡率并呈浓度依赖性（P<0.001）。流式周期实验结果显示,SPHSⅠ和SPHSⅡ阻滞Hep G2和SMMC-7721细胞于G2期,呈浓度依赖性（P<0.001）。流式凋亡实验结果显示,NAC能部分阻断SPHSⅠ和SPHSⅡ对HepG2和SMMC-7721细胞的凋亡诱导作用,NAC+SPHSⅠ（或SPHSⅡ）组与SPHSⅠ（或SPHSⅡ）组比较有统计学差异（P<0.001）。流式周期实验结果显示,NAC能部分阻断SPHSⅠ和SPHSⅡ对Hep G2和SMMC-7721细胞的周期阻滞作用,NAC+SPHSⅠ（或SPHSⅡ）组与SPHSⅠ（或SPHSⅡ）组比较有统计学差异（P<0.001）。3.流式活性氧实验结果显示,SPHSⅠ和SPHSⅡ能提高HepG2和SMMC-7721细胞的ROS,且呈浓度依赖性（P<0.001）。流式线粒体膜电位实验结果显示,SPHSⅠ和SPHSⅡ能降低Hep G2和SMMC-7721细胞的MMP,且呈浓度依赖性（P<0.001）。流式活性氧实验结果显示,NAC能部分阻断SPHSⅠ对HepG2和SMMC-7721细胞ROS的提高,NAC+SPHSⅠ组与SPHSⅠ组比较有统计学差异（P<0.001）。流式线粒体膜电位实验结果显示,NAC能部分阻断SPHSⅠ和SPHSⅡ对HepG2和SMMC-7721细胞MMP的降低,NAC+SPHSⅠ（或SPHSⅡ）组与SPHSⅠ（或SPHSⅡ）组比较有统计学差异（P<0.01或P<0.05）。WB实验结果显示,SPHSⅠ和SPHSⅡ作用HepG2和SMMC-7721细胞后能上调cleaved caspase-3、-8、-9、Cyto-C和Bax蛋白的表达,下调Bcl-2和PARP蛋白的表达;对MAPK相关蛋白的表达没有影响,但是能显著提高Erk、P38和JNK的磷酸化水平。结论:1.从裂果薯分离得到裂果薯甾体皂苷化合物Ⅰ、裂果薯甾体皂苷化合物Ⅱ和豆甾醇苷化合物,初步建立裂果薯甾体皂苷化合物Ⅰ和裂果薯甾体皂苷化合物Ⅱ的分离制备方法。2.SPHSⅠ和SPHSⅡ对人肝癌HepG2和SMMC-7721细胞均具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其作用机制可能是通过ROS介导的线粒体途径,并调控MAPK信号通路实现的。