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随着人们的生活水平逐渐提高,肥胖人的数量也在逐年增加。全世界的肥胖发病率以惊人的速度增长并已成为人类公共卫生的主要威胁,肥胖会促进高血压,糖尿病,中风,骨关节炎以及癌症的发生,因此,寻找一种有效的方法预防和治疗肥胖是迫切和必要的。目前,人们普遍认为肥胖的原因是由于体内能量吸收和能量消耗的不平衡所致,这导致过量能量的以脂质的形式储存于白色脂肪组织(WAT)中,脂质储存的越多,脂滴越大、分化形成的脂肪细胞越多,人体就越胖。所以抑制肥胖的关键就是抑制前脂肪细胞的分化和促进成熟脂肪细胞的分解。东革阿里(Eurycoma lon gifolia Jack)盛产于马来西亚,在当地同燕窝、锡器并称为三大国宝,其具有很好的降脂作用,此外,还具有抗癌、抗疟疾、改善男性性功能障碍等功效。苦木素二萜类是东革阿里所含主要的化学成分之一,宽缨酮(Eurycomanone,EN)是其主要的活性成分之一。目前EN的降脂作用机制并不明确,这也限制该成分的进一步开发和利用。目的:通过建立体外3T3-L1脂肪细胞模型,研究EN对脂肪分解的作用机制及抑制脂肪细胞形成作用,从而了解其对前脂肪分化阶段及脂肪细胞分解阶段的影响。为EN合理利用提供科学依据,为其开发新药成为可能奠定理论基础。方法:(1)通过检测EN促进脂肪细胞中的甘油三酯的分解效果以及对3T3-L1前脂肪细胞分化成成熟的脂肪细胞的抑制作用,利用油红O染色脂肪细胞,再观察小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的过程中细胞形态变化及脂滴形成情况。(2)通过免疫荧光、Western blotting、荧光定量PCR、siRNA细胞转染、(Q-PCR)等技术阐释EN促进脂肪细胞的脂肪分解的作用机制。结果:(1)当EN浓度≤200μM时,经过EN作用后72 h内,小鼠3T3-L1前脂肪细胞的增殖作用正常,其细胞存活率均在90%左右,和空白对照组(NC)比较无显著性差异(p>0.05)。用台盼蓝检测EN对成熟脂肪细胞的影响,研究结果表明当EN≤200μM时,经过EN作用后24 h内,成熟的脂肪细胞存活率均在100%左右。(2)油红O染色,观察到NC组被油红O染色的区域大于EN组,再用异丙醇重新溶解被染细胞中的油红O,将EN和NC组中油红O进行定量检测,结果NC组的检测值大于EN组的值。用激光共聚焦扫描显微镜观察脂肪细胞分化情况,其拍照结果与油红O检测结果一致。(3)EN显著促进脂肪细胞的脂肪分解,药物作用后PKA、HSL和AKT、AMPK磷酸化蛋白表达水平显著升高,通过H89作用后,PKA、HSL磷酸化蛋白表达水平显著降低,抑制H89均能够在一定程度上显著抑制药物EN促进的脂肪分解。实时荧光定量PCR检测各组细胞脂肪代谢相关基因mRNA结果表明,EN作用后脂肪细胞整个作用过程中促进甘油三酯分解重要的关键基因C-AMP(Cyclic Adenosine monop hosp hate)、PKA(Protein kinase A)和HSL(Hormone-sensitive lipase)的mRNA和蛋白质表达的水平均显著上调,脂肪甘油三酯脂酶ATGL(Adipose tri glyceride lipase)mRNA的表达无明显影响。siRNA转染脂肪细胞中,降低PKA-CA基因的表达,EN作用后,上调PKA-CA、HSL,然而PKA-CB基因基本不受影响。结论:综上所述,EN显著刺激小鼠脂肪细胞的脂肪分解并且能有效的抑制前脂肪细胞的分化,c-AMP/PKA通路和AKT/PDE-3B通路可能同时参与了EN刺激的脂肪分解,同时能抑制3T3-L1前脂肪细胞分化成成熟的脂肪细胞。本研究为其在治疗肥胖的开发应用上建立了科学研究基础。