研究目的:　　 研究LASS2(homosapienslongevityassurancehomologue2ofyeastLAG1)与质子泵的c亚基ATP6L(16kDaproteolipidsubunitofvacuolarH+-ATPase)的相互作用,过表达LASS2对肝癌细胞内、外H+浓度的影响,以及对细胞凋亡的影响及对凋亡相关的信号转导通路的影响。　　 研究方法:　　 (1)用真核载体pBiFC-VC155-LASS2和pBiFC-VN155-ATP6L共同转染SMMC-7721细胞,通过双分子荧光互补分析技术,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,确定LASS2与ATP6L在细胞内相互作用以及形成异源二聚体的亚细胞定位。　　 (2)用pH荧光探针BCECF-AM和BCECF检测细胞内、外H+浓度。　　 (3)采用细菌内同源重组法构建含LASS2基因全长的重组腺病毒载体,并将其转染至SMMC-7721细胞,荧光显微镜检测重组腺病毒对肝癌细胞的感染效率,Westenblot检测感染后目的蛋白的表达。　　 (4)通过MTT实验和AnnexinV/PI双标法检测LASS2过表达后对SMMC-7721细胞生长和凋亡的影响。　　 (5)通过Westernblot方法检测SMMC-7721细胞过表达LASS2后,Caspase-9、Caspase-3的激活,Bcl-2、Bax、p-ERK的表达水平变化。　　 研究结果:　　 (1)双分子荧光互补分析实验证实LASS2与ATP6L在细胞内特异性结合,并且它们形成的蛋白异源二聚体主要分布在细胞质中。　　 (2)成功构建了重组腺病毒载体Ad-LASS2,并将其感染SMMC-7721细胞,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白GFP的表达,感染效率达70%以上,Westernblot结果表明,LASS2能在细胞中持续稳定的表达。　　 (3)过表达LASS2的SMMC-7721细胞内H+浓度升高,细胞外H+浓度降低。　　 (4)MTT和流式结果表明SMMC-7721细胞过表达LASS2后,其生长能力受到了显著的抑制,凋亡率增加。　　 (5)Westernblot结果表明SMMC-7721细胞过表达LASS2后,活性的Cleaved-Caspase-9和Cleaved-Caspase-3含量升高,Bax的蛋白表达水平升高,Bcl-2水平降低,p-ERK水平降低。　　 结论：　　 LASS2可能通过与ATP6L结合抑制V-ATPase的外排H+能力,抑制ERK1/2的激活,下调Bcl-2,上调Bax,进而激活线粒体凋亡通路,进一步活化Caspase-9、Caspase-3,促进肝癌细胞的凋亡。