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肝癌是我国高发性恶性肿瘤,分布广,转移率高,其发生的分子机制尚不是很明确。目前,从信号传导途径来研究与治疗癌症已成为癌症治疗的新兴领域。细胞因子通过与细胞上的特异性受体相结合,激发一系列的信号传导途径,并引起下游相关基因的表达,从而影响细胞乃至组织的生物学功能效应。现有研究揭示,许多癌症的发生与细胞内相关信号途径的异常激活或者失活相关。 STAT(Signal transducer and activator of transcription)是存在于细胞质中的一类潜在的信号转导与转录激活因子。作为信号转导与转录激活因子,这类蛋白在细胞信号传递中起着承上启下的作用,在细胞的生长、存活、增殖和分化中起着非常重要的作用。研究表明,STAT3的持续激活与许多肿瘤和癌症相关,如黑色素瘤、骨髓瘤、急慢性白血病、头颈癌、乳腺癌、前列腺癌、小细胞癌等。 本文选取了信号转导和转录激活因子STAT3为研究对象,研究了肝癌细胞BEL-7402中STAT3的异常活化及其对细胞迁移的作用,并研究了肝癌细胞HepG2中STAT3途径与WNT信号途径中β-Catenin的相互关系以及尝试用STAT3 RNA干扰方法研究STAT3的功能,试图在细胞水平上研究寻找治疗肝癌的方法。 1.成功构建了绿色荧光蛋白(GFP)标记的STAT3野生型(WT)/突变体(CYF)融合质粒,将其转入细胞,以荧光素酶报告系统验证了融合蛋白的活性:通过测定绿色荧光为标记的细胞迁移距离的方法证实,过表达野生型STAT3对肝癌细胞系BEL-7402细胞迁移有促进作用,而突变体STAT3能够降低癌细胞的迁移。 2.利用细胞的免疫组化双色染色和蛋白免疫沉淀的方法证实STAT3与β-catenin可以形成复合物,随着细胞密度的增加,STAT3与野生型β-catenin形成的复合物含量减少。但利用荧光素酶活性分析方法发现STAT3对β-catenin转录激活活性没有明显的影响。实验表明,STAT3信号途径与β-catenin信号途径之间很有可能存在着一定的内在联系。 3.用腺病毒载体构建了可持续表达STAT3 RNAi双链RNA短片段的腺病毒AdEasy-H1-STAT3i,以Western Blotting来研究它的RNA抑制效果,试图以基