本以文牙鲆胚胎为材料,研究了麦管直径、平衡温度、装卵个数等影响鱼类胚胎玻璃化冷冻保存的几个方面的内容。对牙鲆胚胎的玻璃化冷冻保存方法和条件进行了优化,特别对玻璃化液组成进行了改良,对胚胎发育时期和平衡时间进行了筛选,对胚胎的冷敏感性和冷冻损伤机理进行了探讨。 结果表明:含有多种抗冻剂的玻璃化液PMDD(2%PVP),玻璃化稳定,脱玻璃化率较低,适宜进行玻璃化冷冻。在胚胎发育过程中,牙鲆各期胚胎对玻璃化液的适应能力不同,尾芽期胚胎较其他时期耐受力强。冻前平衡时间跟牙鲆胚胎的质量有密切的关系,一般情况下,在玻璃化液PMDD(2%PVP)中平衡40min就足以使玻璃化液渗透完全;时间延长,成活率显著降低(P<0.05)。牙鲆胚胎在0℃与4℃下平衡的成活率显著高于15℃(P<0.05)。非渗透性抗冻剂PVP、Ficoll可以增强玻璃化液的稳定性,降低脱玻璃化率。牙鲆胚胎具有高的冷敏感性,温度降到0℃以下,成活率显著降低;这种冷敏感性随胚胎发育阶段而变化,发育后期的胚胎比发育早期的胚胎显示出了对低温更高的耐受力。在三种规格的麦管中,直径为2.5mm的麦管脱玻璃化率最低,适宜进行玻璃化冷冻保存的研究;在1个直径2.5mm的麦管中装入2-5粒牙鲆胚胎,脱玻璃化率的改变无显著差异。牙鲆胚胎的冻前平衡过程及洗脱过程的显微观察表明,抗冻剂向胚胎渗透的最大障碍是卵黄囊;牙鲆胚胎在进行玻璃化冷冻保存时,卵黄囊是极易受损伤的部位。 根据优化的条件,对牙鲆两个时期的胚胎进行超低温冷冻保存实验,共成活4次,获得成活胚胎8粒,其中7粒孵化出健康的鱼苗。本文为鱼类胚胎冷冻保存技术的建立提供基础资料,并证明了牙鲆胚胎玻璃化冷冻保存的可能性。