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紫龙金是我国治疗肿瘤的一种有效的民间验方。经多次实验，我们发现该药对胃癌BGC-823细胞G2期具有阻滞作用，并能影响癌细胞的生长、增殖及侵袭力。我们用基因芯片结合流式细胞术、RT-PCR、Western-blot等技术检测紫龙金对胃癌-823细胞基因表达的影响，旨在进一步探讨紫龙金抗肿瘤作用的分子机制。 一．本文的研究内容包括以下四部分： 1．紫龙金对人胃癌BGC—823细胞生长、增殖的影响： （1）生长曲线绘制：观察紫龙金、HMBA（六亚甲基二乙酰胺）对人胃癌BGC—823细胞生长状况的影响。 （2）软琼脂集落形成实验：观察紫龙金对人胃癌BGC—823细胞集落形成状况并照相。 2．基因芯片检测紫龙金对人胃癌BGC—823细胞基因差异表达： 细胞培养：人胃癌BGC—823细胞用含15％胎牛血清的DMEM培养基，在37℃、5％CO2培养箱中培养；细胞同步化：用2.5mM胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidine，TdR）及5.5Kg/cm2压力的N2O将细胞同步化并将细胞分成两组：Ⅰ．紫龙金组：同步过程中的人胃癌BGC—823细胞，于第二次TdR释放后3小时更换含0.5mg紫龙金/ml的15％胎牛血清的DMEM培养液培养；Ⅱ．对照组：仅更换含15％胎牛血清的DMEM培养液培养；37℃、5％CO2培养箱中继续培养7小时；流式细胞仪检测细胞同步效果并观察紫龙金对G2期有否阻滞作用;计算有丝分裂指数以进一步区分G2、M期细胞的百分比;基因芯片检测:包括抽提人胃癌BGC一823细胞total RNA、CDNA探针合成、cDNA探针与基因芯片杂交、将基因芯片置于磷屏上显影、用Array Gauge VI .0软件分析基因芯片结果。3.部分差异基因（eyelin EZ，p16）的分析: 选出cyclin EZ、pl6基因进行分析:1 .RT一PCR验证:将Total RNA中的mRNA逆转录成cDNA后进行PCR反应，并用e一aCtin基因做内参照，检测基因的mRNA表达水平，并将之与基因芯片结果作比较;H .Western b10t检测差异基因的蛋白质表达水平:提取细胞蛋白，进行蛋白浓度测定，并依次在丙烯酞胺凝胶上分离蛋白质、转膜、封闭、加一抗、辣根酶标记的二抗、加显色发光底物、压片、显影、定影，并用日一actin蛋白做内参照，ChemilmagerT肠5500灰度扫描仪测蛋白条带亮度。 人胃癌BGC一823细胞P16反义封闭实验:封闭P16 mRNA起始密码子及终止密码子的寡核普酸各一条，合成时进行全程硫代修饰，封闭后用western一blot检测其对P16蛋白的影响，用日一aC t in蛋白做内参照并用流式细胞术检测细胞周期的变化。4.紫龙金对人胃癌BGC一823细胞侵袭力的影响:（1） Matrigel体外侵袭实验观察紫龙金对人胃癌BGC一823细胞侵袭力的影响。ICAM一基因的影响:（2）RT一PCR及Western blot分析ICAM一1基因:（方法与上述相同）。（3）免疫荧光（间接法）检测紫龙金对人胃癌BGC一823细胞ICAM一蛋白分布的影响:细胞培养，并分别在对照组、紫龙金组细胞中加入一抗、F工TC标记的二抗，用甘油:PBS（9:l，pHS.5）封片，荧光显微镜下观察、照相。一本文主要结果如下:1.紫龙金对人胃癌BGC一823细胞生长、增殖的影响:（l）生长曲线绘制:发现紫龙金、HMBA能明显抑制人胃癌BGC一823细胞增长，紫龙金抑制效果较HMBA略强。（2）软琼脂集落形成实验:发现紫龙金能明显抑制人胃癌BGC一823细胞的集落形成。2.基因芯片检测紫龙金对人胃癌BGC一823细胞基因差异表达: 在1176个基因中，用药后升高5.0一9.9倍者18个、10倍以上者9个，降低5.0一9.9倍者39个、10倍以上者17个。此外，发现紫龙金对人胃癌BGC一823细胞GZ期有阻滞作用。3.部分差异基因（eyelin EZ，p16）的分析: 紫龙金组的cyd inEZ基因、pl6基因的mRNA水平较对照组高，紫龙金组中两种基因的蛋白水平亦较对照组高。 人胃癌BGC一823细胞P16基因反义封闭实验:与对照组相比，反义封闭后Gl期细胞百分比减少。4.紫龙金对人胃癌BGC一823细胞侵袭力的影响:（1） Matrigel体外侵袭实验发现紫龙金能使穿透聚碳酸酷膜的人胃癌BGC一823细胞数量明显减少。（2）紫龙金组的ICAM一l基因的tnRNA水平较对照组低，其蛋白水平亦较对照组低。（3）免疫荧光（间接法）检测显示紫龙金能使人胃癌BGC一823细胞ICAM吐蛋白的荧光信号基本消失。三.本文得出以下结论:1.紫龙金能明显抑制人胃癌BGC一823细胞增长;2.对人胃癌BGC一823细胞GZ期具有显著阻滞作用:3.能提高人胃癌BGC一823细胞CyClinEZ、P16基因的mRNA及其蛋白水平;4.明显抑制人胃癌BGC一823细胞侵袭力;5.降低人胃癌BGC一823细胞ICAM几基因的mRNA及其蛋白水平;6.研究中发现的众多差异基因，为今后的科研工作提供有益的线索。