【摘 要】
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目的:构建恒定链与乙肝病毒表面抗原"a"位点基因的融合基因,希望通过恒定链的引导肽段将HBsAg"a"位点蛋白导入外来体形成通路,并负载到外来体上,为研制针对肝炎后肝癌的双靶
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目的:构建恒定链与乙肝病毒表面抗原"a"位点基因的融合基因,希望通过恒定链的引导肽段将HBsAg"a"位点蛋白导入外来体形成通路,并负载到外来体上,为研制针对肝炎后肝癌的双靶向外来体瘤苗奠定基础.方法:该研究通过基因重组技术,用乙肝病毒表面抗原a位点基因替代CD74分子(invariant chain,Ii,恒定链)的CLIP片段基因,并将融合基因装载入真核表达载体pcDNA3.1(+)/V5-His,并转入hepG2肝癌细胞系,通过细胞免疫化学检测乙肝病毒表面抗原的表达.结论:1)该研究成功构建乙肝表面抗原a位点基因与CD74分子基因融合的真核表达载体:pcIiSa;2)该载体可以在肝癌hepG2细胞系中表达出乙肝表面抗原.目的:外来体是具有良好应用及开发前景的非细胞性肿瘤疫苗,但是传统的超高速密度梯度离心制备法限制了对其的研究和应用.该研究利用外来体的物理特性,用基于孔径分离的生物膜离心过滤法制备得到了外来体,有效的降低了外来体研究及应用的技术门槛.方法:以外周血当个核细胞体外培养诱导的树突状细胞的培养上清作为外来体的来源,分别用传统的超高速密度梯度离心法和机遇生物膜分离技术的离心过滤法制备外来体,再利用透射电镜进行两者之间形态学鉴定,聚丙烯酰胺凝胶电泳进行蛋白质谱鉴定.结论:用基于生物膜分离技术的离心过滤法可以制备出外来体.
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