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目的:观察红景天苷（Salidroside）对缺氧所致的PC12细胞损伤以及血清剥夺所致PC12细胞自噬的影响，探讨并阐明红景天苷改善缺血性脑卒中(Ischemic stroke)的分子生物学机制，为红景天苷用于脑卒中药物治疗提供理论依据。 方法:(1)论文第一部分内容:以PC12细胞作为体外研究载体，在氯化钴(CobaltChloride，CoCl2)诱导下建立体外缺血/缺氧损伤模型。在诱导产生缺氧损伤模型的同时，给予不同剂量红景天苷干预。MTT法检测细胞活力;电子显微镜观察细胞超微结构改变;流式细胞术检测细胞内活性氧的改变;Real-time PCR检测HIF-1α和REDD1基因水平表达变化;Western Blot检测HIF-1α、REDD1蛋白表达以及mTOR、p70S6k蛋白磷酸化的结果。 (2)论文第二部分内容:在pBI-Tet载体上构建pBI-tdTOM/LC3B/eGFP、pBI-tdTOM/LC3B/eGFP-Rab5S34N表达质粒。血清剥夺条件下诱导PC12细胞自噬，在不同剂量红景天苷干预下观察药物对细胞自噬的影响。在PC12细胞中转染不同的表达质粒，荧光显微镜及Western-Blot检测细胞自噬的变化。观察Rab5S34N过表达对细胞自噬以及对红景天苷干预后自噬激活或抑制作用的影响，进一步明确其作用靶点。 结果:论文第一部分:(1)MTT法结果提示400μM氯化钴干预12小时是诱导体外缺氧损伤模型的最佳浓度;(2) MTT法结果提示90μM红景天苷干预12h可以明显提高缺氧细胞的活力;(3)电镜结果提示红景天苷能够显著改善缺氧所致的PC12细胞线粒体超微结构和细胞核受损改变;(4)流式细胞术结果提示红景天苷能够显著降低ROS的产生(P＜0.05);(5) Western-blot结果和Real-time PCR结果提示缺氧条件下HIF-1α和REDD1的表达升高，mTOR和p70S6K磷酸化水平降低，而红景天苷能够下调HIF-1α和REDD1的表达并维持缺氧作用下mTOR通路磷酸化水平，使用mTOR抑制剂RAD001能够阻断该通路的磷酸化水平。 论文第二部分:(1)Western-blot结果提示血清剥夺条件下PC12细胞内源性LC3Ⅱ/LC3Ⅰ（内源性自噬标记物）比值增加，而红景天苷干预能够进一步提高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值。(2)PC12细胞转染pBI-tdTOM/LC3B/eGFP、pBI-tdTOM/LC3B/eGFP-Rab5SN表达质粒后，荧光显微镜下观察各组自噬细胞百分数。血清剥夺条件下自噬细胞百分数增加(P＜0.05)，红景天苷干预后可以进一步增加自噬细胞百分数（P＜0.05），而转染tdTOM-LC3B-eGFP/Rab5SN表达质粒组的细胞自噬百分数均明显下降(p＜0.05);(3)采用Western-blot验证tdTOM-LC3BⅡ/tdTOM-LC3BⅠ（外源性自噬标记物）的表达情况，结果提示血清剥夺条件下tdTOM-LC3BⅡ/tdTOM-LC3BⅠ比值增加，红景天苷干预后可以进一步增加该比值。而转染tdTOM-LC3B-eGFP/Rab5SN表达质粒组中tdTOM-LC3BⅡ/tdTOM-LC3BⅠ比值均显著下降，提示过表达Rab5SN能够在某种程度上阻断血清剥夺以及红景天苷干预所导致的细胞自噬水平升高的变化。 结论:(1)红景天苷对CoCl2诱导的PC12细胞缺氧损伤具有保护作用，其具体分子机制可能和维持线粒体结构完整性，降低ROS氧的产生，下调HIF-1α和REDD1的表达并维持缺氧作用下mTOR通路受抑制状态的活性，而起作用。 (2)红景天苷能够进一步激活血清剥夺条件下的细胞自噬水平，这可能是细胞保护性自噬激活的一个过程，这个过程能够被过表达的Rab5S34N阻止，提示红景天苷可能通过Rab5介导的相关通路调控细胞自噬水平。