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阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种比较常见的衰老相关的神经退行性疾病,目前尚无特异的治疗和诊断方法。AD的主要病理特征是细胞外淀粉样肽(amyloidβ-peptide, Ap)沉积形成老年斑(senile plaque, SP)、细胞内tau蛋白积聚形成的神经纤维缠结(neurofibrillary tangle, NFT)以及神经元丢失及脑萎缩。目前认为,Aβ异常折叠和聚集是其神经元损伤作用的主要始动环节,形成的Aβ寡聚体主要以C端肽为核心,而将N端肽暴露于表面。研究表明,针对Aβ不同肽段的单抗在AD治疗和早期诊断中具有各自的优势,而针对AβN端的单抗通常亲和力较高,比较适合用于AD的诊断和治疗研究。本课题主要研究了具有N端表位的抗Aβ单抗体外细胞保护作用以及此类抗体在AD检测中的初步应用。一、针对N端表位的抗Aβ单克隆抗体的体外保护作用首先,选择反式视黄酸(Trans Retinoic Acid, TRA)作为分化诱导剂,用可溶性Aβ寡聚体引起神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤,在倒置显微镜下观察细胞形态,并用MTT法测定细胞活力,建立较稳定的Aβ体外细胞损伤的实验体系。然后,利用本实验室保存的3株针对不同位点的N端表位Aβ单抗,分别为抗人Aβ寡聚体单抗A8(表位Aβ1-6)、A6F7(表位Aβ1-11)和抗人Aβ单抗C9(表位Aβ4-11),研究具有N端表位的抗Aβ单抗对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的体外保护作用。结果显示：(1)与对照组相比,对TRA诱导的SH-SY5Y细胞,低剂量Aβ寡聚体(10μM)即可引起细胞活力降低(p<0.05)；而对未用TRA诱导的SH-SY5Y细胞,高剂量Aβ寡聚体(20μM),尚未引起明显的细胞毒性(p>0.05)。说明诱导分化是Aβ寡聚体在体外引起SH-SY5Y细胞毒性的重要条件。(2)设置0、2、4、6、8、10、12、14、20μMAβ寡聚体实验组,发现当加入10μMAβ寡聚体可得到显著性毒性作用(p<0.01),细胞形态变化明显；当Aβ寡聚体浓度增加时,毒性更加明显。说明Aβ寡聚体诱导细胞毒性具有剂量依赖性。(3)诱导后,1μMA8、A6F7和C9这3株单抗均可显著降低Aβ寡聚体对细胞的毒性作用(p<0.05)。但3株单抗之间的保护作用差异不显著(p>0.05)。二、针对N端表位的抗Aβ单克隆抗体在Aβ检测中的初步应用以活化生物素标记单抗A8,利用间接ELISA测定生物素化A8的最佳稀释度。以体外聚集的Aβ寡聚体作为检测标准品,分别用单抗A6F7(表位1-11)、C9(表位Aβ1-6)和4G8(表位Aβ17-28)作为包被抗体,用生物素化A8作为检测抗体,用亲和素-辣根过氧化物酶作为检测系统,建立Aβ寡聚体标准品的双抗体夹心ELISA检测体系。然后利用此体系对AD病人外周血标本进行初步检测。结果显示：(1)Aβ寡聚体标准品检测体系中,生物素化A8的最佳稀释度为1：800；4G8(1：800)作为包被抗体时,标准品的检测效果优于A6F7、或C9做包被抗体。(2)利用此检测体系,建立双抗体夹心Aβ42标准品检测的标准曲线,线性范围在0.33-19.5 ng/mL,灵敏度为330 pg/mL。(3)用这种方法初步检测了12例AD患者及2例同龄的正常对照血浆中Aβ含量,AD患者组为(52.2±11.3)ng/mL,同龄对照组为(12.5±9.6)ng/mL,AD患者组血浆中β淀粉样肽含量是同龄对照组人数的4.16倍。综上,本研究建立了较为稳定的Aβ体外细胞损伤的实验体系,并发现3株针对不同位点的N端表位抗Aβ单抗均具有体外细胞保护作用,之间无明显差异；同时以生物素化N端表位抗体作为检测抗体,以4G8为包被抗体,初步建立了Aβ标准品的双抗体夹心ELISA系统,为抗Aβ抗体的进一步应用与研究奠定实验基础。