广西红树植物内生放线菌分离、鉴定及活性筛选

来源 :广西民族大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:guoerxong
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放线菌是天然抗生素的重要来源,是寻找天然抗感染活性产物的出发菌。同时,放线菌也是酶、免疫抑制剂、免疫调节剂、有机酸、氨基酸、甾体和生物碱等许多对人类有用的生物活性物质的产生菌,迄今为止发现的2万多种生物活性物质中,约45%是放线菌产生的。为了发掘广西北部湾海域红树植物内生放线菌资源,本研究选用14种分离培养基,6种分离方法对采集自广西北部湾海域5个红树林样点内的12种红树植物内生放线菌进行研究,将获得的菌株通过培养特征和菌落形态学特征初步去除重复,然后进行16S r RNA基因序列扩增并测序,通过系统发育树的构建重点了解广西红树植物内生放线菌资源的多样性,并建立菌种资源库;同时,以点植法和滤纸片琼脂扩散法对获得的内生放线菌进行抗菌活性和产酶活性的筛选,以期获得有潜在研究价值的化合物,为今后开发利用广西北部湾红树植物内生放线菌资源提供数据支持和实践基础,为该区域红树植物内生放线菌资源的保护和调查提供参考依据,同时对广西北部湾红树内生放线菌的积累及药用微生物资源的开拓具有重大的意义。具体实验结果如下:采用6种分离方法和14种培养基从5个样点12种红树植物中共分离到567株内生放线菌。采用3种培养基对分离到的567株内生放线菌初步去除重复后获得231株菌。成功鉴定其中的200株,通过16S r RNA基因序列分析及与Ezbiocloud中的典型性菌株比对,它们属于5个亚目7个科9个属34个种,优势菌群为拟诺卡氏菌属和链霉菌属的菌株,更从中发现了12株同源性低于98.6%的菌株,可能为潜在的新种。采用点植法和滤纸片扩散法,以6种细菌、5株敏感型白色念珠菌和5株耐药型白色念珠菌为指示菌,筛选231株实验菌株的抗菌活性。结果表明有51株内生放线菌能抑制至少一株敏感型白色念珠菌的生长,占实验菌株的22.1%;96株菌株能抑制至少一株耐药型白色念珠菌的生长,占实验菌株的41.6%;175株菌株能抑制至少一种指示细菌的生长,占实验菌株的75.6%。链霉属菌株的抗菌谱比较广,拟诺卡氏菌属等稀有放线菌属的菌株抗菌谱相对较小,但抗菌效果较好。以231株内生放线菌为实验菌株,筛选包括脂肪酶、纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶在内的4种酶活性,筛选出147株至少有1种酶活性,同时具有4种酶活性的为31株。其中有139株菌具有脂肪酶活性,37株菌具有纤维素酶活性,100株菌具有淀粉酶活性,99株菌具有蛋白酶活性。测定了5株内生放线菌产生的蛋白酶在高盐和高碱条件下的酶活力,并与胰蛋白酶做比较。结果表明这5株内生放线菌不仅能在高盐高碱的条件下生长,其产生的蛋白酶在高盐和高碱的反应条件下仍具有很高的酶活力。
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