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艾滋病是威胁人类的健康的最重要的传染病之一,其在全球的流行形势十分严峻,疫苗是预防控制传染病的最有效最经济的手段,因此研制出安全有效的艾滋病疫苗迫在眉睫。DNA疫苗作为最具发展潜力的新型疫苗策略,可以有效的诱导细胞免疫反应及体液免疫反应,同时可以诱导长期免疫记忆。然而,较弱的免疫原性一直是制约DNA疫苗产业化的瓶颈。本研究优化了HIV-1双表达盒DNA疫苗pENVPOL及pGAGTNR的免疫策略,并联合重组复制型痘苗病毒疫苗VTKgpe及蛋白疫苗gp140,采用初免-加强策略,大幅度提高了HIV-1疫苗的免疫原性。本研究首先探索了体内电穿孔技术对DNA疫苗质粒pENVPOL及pGAGTNR免疫原性的影响。实验结果表明,内电穿孔技术可以显著提升pENVPOL和pGAGTNR质粒在小鼠体内的表达水平。50μg DNA质粒使用体内电穿孔介导后,诱导的HIV-1 Env特异性抗体反应滴度提高了10倍,HIV-1抗原特异性细胞免疫反应强度提高了1倍；5μg DNA在使用体内电穿孔介导后,诱导的Env特异性抗体反应滴度仍为50μg单独肌肉注射组的5倍,总体HIV-1抗原特异性细胞免疫反应与50μg单独肌肉注射组基本相同。本研究进一步探索了pDRVI4.0载体编码的IL-15, BCG及PA-MSHA佐剂与DNA疫苗联合免疫使用体内电穿孔技术介导对其免疫原性的影响。小鼠实验结果显示,使用体内电穿孔介导后,HIV-1 DNA疫苗联合佐剂免疫诱导的HIV-1Env特异性体液免疫应答较DNA疫苗-佐剂肌肉注射提高了4-10倍,HIV-1总抗原特异性细胞免疫应答提高了1-3倍。在使用体内电穿孔技术介导后,DNA疫苗与佐剂联合免疫,诱导的体液与细胞免疫应答较DNA疫苗单独免疫亦有显著性提升。目前普遍认可的提高HIV-1疫苗特异性反应的策略是DNA疫苗初免后用其他的活病毒载体疫苗或者重组抗原蛋白进行免疫加强。但大多数临床试验中初免与加强之间的免疫间隔均有不同,也无相关研究进行过报道。本研究对DNA疫苗初免,重组痘苗VTKgpe加强,HIV-1 CN54 gp140蛋白加强之间的免疫间隔进行了比较,以期优化HIV-1疫苗初免-加强免疫策略。结果表明,DNA疫苗初免,VTKgpe加强间隔16周效果最佳,诱导的HIV-1 Env特异性抗体滴度达到105,分泌IFN-γ的T细胞数为5966.4/106细胞。DNA疫苗初免,间隔16周VTKgpe加强,之后间隔4周或8周gp140蛋白加强后,小鼠体液免疫反应结果较未免疫gp140时有显著提高,小鼠和兔子实验结果无显著性差异,但VTKgpe与gp140蛋白间隔4周免疫结果较稳定,组内差异较小。在HIV预防控制领域,HIV-1疫苗与抗逆转录病毒药物均发挥了重要作用,临床试验中也都显示了一定的保护效果,但均未能完全预防和控制HIV-1的传播。迄今为止,HIV-1疫苗与抗逆转录病毒药物一直独立的发挥各自作用,二者联合使用是否可以发挥更强的协同保护作用仍未有研究揭露。本研究探索了上述HIV-1疫苗与TDF/FTC药物联合使用在中国恒河猴模型中对SHIV-162P3攻毒的免疫保护效果。实验结果显示,对于SHIV162P3病毒小剂量多次直肠攻毒,空白对照组完全感染,疫苗免疫组(3×DNA-重组痘苗病毒疫苗-3×蛋白疫苗)显示了4/8保护,iPrEP策略TDF/FTC给药组(每次攻毒前2hr给药)显示了5/8保护,疫苗与药物联合使用组保护效果最好,显示了7/8保护,且为时间极短的一过性感染,病毒载量峰值也明显降低。表明HIV-1疫苗与抗逆转录病毒药物这两种独立应用的预防控制HIV的策略可以发挥良好的协同效应,从而为HIV预防控制的临床试验及人体应用提供了新的思路。