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研究背景:胆固醇结石病(胆石病)是一种常见疾病。遗传因素和环境因素共同作用,致使胆汁胆固醇过饱和、促/抗成核因子失衡以及胆囊动力功能障碍,促进了胆石形成。其中胆固醇过饱和是首要条件。盐酸小檗碱(berberine,BBR)是一种治疗腹泻等肠道感染的常用药,近年来其在降脂、降糖、抗癌、免疫调节等方面的作用受到关注。本文第一部分旨在研究成石饲料诱导小鼠胆固醇结石形成过程中肠道菌群的改变。本文第二部分旨在研究盐酸小檗碱对于降低肠道胆固醇吸收,调整肠道菌群,进而对胆固醇和胆汁酸代谢调节作用机制及其对胆石形成的影响。本文第三部分旨在研究依折麦布(Ezetimibe,Eze)作为小肠胆固醇转运蛋白尼曼匹克C1样1蛋白抑制剂,对成石饲料喂养小鼠,胆囊胆固醇结石形成的抑制作用。材料和方法:采用含1.25%胆固醇和0.5%胆酸的成石饲料(lithogenic diet,LD)喂养易结石C57BL/6J小鼠,建立小鼠胆固醇结石病模型(LD组)。小檗碱治疗实验组分别给予50mg/kg体重/天(BBR50组)和100mg/kg体重/天(BBR100组)两种剂量的盐酸小檗碱口服。依折麦布治疗实验组给予5mg/kg体重/天的依折麦布口服。实验中设置普通饲料喂养的空白对照组(Chow组)。喂养56天后,采集肝脏、胆囊、肠道组织等多种器官样本以及粪便,检测肠肝循环中,胆固醇和胆汁酸代谢状况、关键基因表达以及肠道菌群的改变,并观察小鼠胆囊结石形成率。结果:(1)成石饲料改变小鼠肠道菌群谱,肠道微生物在丰度、多样性和组成上均发生了巨大变化,而盐酸小檗碱具有恢复肠道菌群丰度和多样性,重塑小鼠肠道菌群的作用;(2)盐酸小檗碱大幅降低小肠胆固醇摄取率(Chow组59.37±2.53、LD组59.43±3.22、BBR50组36.96±5.31、BBR100组28.41±3.41),与LD组比较降幅达38%~52%;(3)盐酸小檗碱降低肝脏游离胆固醇含量(Chow组0.50±0.02、LD组0.78±0.02、BBR50组0.76±0.02、BBR100组0.68±0.04)和胆固醇脂含量(Chow组3.24±0.11、LD组40.37±2.30、BBR50组32.97±2.94、BBR100组19.11±2.82);(4)盐酸小檗碱通过抑制肠道含7α脱羟酶活性的多种梭菌属细菌(Clostridium),降低次级胆汁酸含量,进而降低了胆汁中的胆汁酸疏水指数(Chow组-0.1945±0.0096、LD组0.1211±0.0085、BBR50组0.0407±0.0130、BBR100组0.0090±0.0050);(5)盐酸小檗碱降低了胆囊胆汁中胆固醇含量,增加胆汁酸含量,降低了胆固醇饱和指数(Chow组0.29±0.02、LD组1.44±0.22、BBR50组1.20±0.05、BBR100组0.90±0.12),减少结石形成。(6)成石饲料喂养,小鼠胆囊结石形成率为100%,依折麦布则完全抑制结石形成(0%);(7)Eze组小鼠小肠胆固醇吸收率较LD组显著降低(9.29%±4.32%比58.62%±3.10%,P<0.01);(8)Eze组血浆胆固醇(1.11±0.10mmol/L)和肝脏组织胆固醇含量(2.70±0.07mg/g组织)均较LD组(4.99±0.50 mmol/L和22.92±2.39 mg/g组织)显著降低,P<0.05;(9)依折麦布降低小鼠胆汁中胆固醇含量(Eze组:2.72±0.29比LD组:10.87±1.46mmol/L,P<0.01)和胆固醇饱和指数(Eze组:0.57±0.07比LD组:1.42±0.19,P<0.01);结论:(1)盐酸小檗碱抑制小肠胆固醇摄取,减轻成石饲料喂养下小鼠肝脏胆固醇负荷,并通过重塑肠道菌群,抑制次级胆汁酸合成,调节胆汁酸代谢,上述作用具有降低胆汁胆固醇饱和度,抑制胆囊结石形成的作用。本研究结果对盐酸小檗碱调节胆固醇和胆汁酸代谢的机制提供了新试验依据。(2)依折麦布通过抑制小肠胆固醇肠道摄取,具有预防胆囊结石形成的作用。