氧化还原平衡在家禽的正常生长中起到了重要的作用,然而外界众多的环境因子会诱导家禽体内活性氧的产生,损伤家禽的抗氧化系统,诱导氧化应激的发生。家禽氧化应激的发生会导致对营养物质代谢障碍,引起生长缓慢,严重时会引起各种疾病,造成死亡。通过日粮中添加抗氧化剂,减少外界因子诱导的氧化性能,增强和保护家禽的抗氧化系统受到了较多的关注。α-硫辛酸是在生物体内发现的一种八碳羧酸,主要功能是作为线粒体中氧化磷酸化过程中的多酶复合物的辅因子,维持线粒体功能。日粮中添加α-硫辛酸能够提高机体的抗氧化性能,对由于衰老造成的线粒体功能障碍和由于脂多糖注射或紫外辐射诱导的氧化应激具有保护性作用。敌草快和鱼藤酮注射会诱导机体氧化应激的发生。因此本研究分别使用腹腔注射敌草快和鱼藤酮来构建急性氧化应激模型与慢性氧化应激模型,来研究日粮中添加α-硫辛酸对敌草快和鱼藤酮注射造成的肉鸡氧化损伤是否具有保护性效果,并初步探讨其作用机理。1.研究日粮中添加不同水平的a-硫辛酸对肉鸡生长性能、胴体性状,肉品质和抗氧化功能的影响。选用1日龄公雏AA肉鸡240只,随机分为5个处理组,每个处理8个重复,每个重复6只鸡。每处理组分别在基础日粮的基础上添加0、250、500、750或1000mg/kg的α-硫辛酸。试验期42d,结果显示：日粮中添加500或750 mg/kg的α-硫辛酸显著增加了肉鸡的平均采食量(AFI)和体增重(BWG)(P< 0.05),而日粮中添加1000 mg/kg的α-硫辛酸显著的降低平均采食量和体增重(P<0.05),其中在前期添加更为显著(P<0.01)。添加α-硫辛酸对料重比(FCR)未见显著影响。日粮中添加α-硫辛酸显著降低了肉鸡的腹脂率,但是并未影响屠宰率、全净膛率、胸肌率和腿肌率。添加α-硫辛酸显著提高鸡胸肉pH24h(P<0.05),降低滴水损失和蒸煮损失(P<0.05),降低剪切力(P<0.05)和质构中硬度(P<0.01),同时还增加胸肉的内聚性(P<0.05)。添加α-硫辛酸增加肉鸡血清,肝脏和胸肌中的总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽(GSH)的含量(P<0.05),降低了丙二醛(MDA)的含量(P<0.05),同时增加了总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性(P<0.05)。日粮中添加α-硫辛酸降低了黄嘌呤氧化酶(XO)、单胺氧化酶(MAO)的活性(P<0.05),升高了总一氧化氮合成酶(T-NOS)的活性(P<0.05)。添加α-硫辛酸增加了贮藏期间鸡胸肉中T-SOD活性和GSH的含量(P<0.05)。T-SOD活性和GSH含量在贮藏前两天表现为升高(P<0.05),在随后的五天表现为显著降低(P<0.05)。MDA和蛋白羰基的含量随着α[-硫辛酸的添加而逐渐降低(P<0.05),然而在贮藏的最初两天出现降低(P<0.05),随后的五天显著升高(P<0.05)。添加α-硫辛酸降低了肌纤维蛋白溶解度和增加了肌浆蛋白溶解度(P<0.05)。2.探讨不同阶段的α-硫辛酸添加对肉鸡生长性能,抗氧化性能和肉品质的影响。选择1日龄公雏AA肉鸡256只随机分为4组,全程未添加作为第1组(对照组)只在前期添加作为第2组(前期添加),只在后期添加作为第3组(后期添加),全程添加作为第4组(全程添加),每组8个重复,每个重复8只鸡。α-硫辛酸的添加剂量为500 mg/kg.结果表明：日粮中添加α-硫辛酸提高了肉鸡的均采食量和均增重,尤其是前期添加达到显著水平(P<0.05),但不同处理对肉鸡的料肉比无显著影响(P>0.05)。α-硫辛酸后期添加和全程添加降低肉鸡的腹脂率(P<0.05)。添加α-硫辛酸提高了处理组的T-AOC,表现在血清,肝脏和胸肌中(P<0.05),但是在前期添加与后期添加之间无显著差异(P>0.05)。添加α-硫辛酸提高了血清,肝脏和胸肌中抗氧化酶的活性(P<0.05),同时也降低了肝脏和胸肌中MDA含量(P<0.05)但在前期添加与后期添加之间无显著差异(P>0.05)。添加α-硫辛酸降低了肝脏和胸肌中XO和MAO活性(P<0.05.),升高肝脏和胸肌中T-NOS活性(P<0.05)。α-硫辛酸的后期添加显著降低了XO活性(P<0.05),但是并没有影响到肝脏与胸肌中的MAO活性(P>0.05)。在肉品质指标上,添加α-硫辛酸表现出与不同水平相类似的变化规律,但是在不同生长阶段添加α-硫辛酸之间并未表现出显著差异。3.利用敌草快腹腔注射建立肉鸡急性氧化应激模型,研究日粮中添加α-硫辛酸和急性氧化应激对机体氧化还原反应的影响。选用肉鸡肠道与肝脏作为研究对象,分别探讨α-硫辛酸对缓解肠道炎症和急性氧化应激下肝脏保护作用机制。试验采用2×2因子试验设计,即日粮处理(基础日粮或基础日粮中添加500 mg/kg的a-硫辛酸日粮)和氧化应激应激处理(腹腔注射敌草快或生理盐水,20 mg/Kg-BW).选用400只1日龄AA肉鸡,随机分成4个处理组,每个处理10个重复,每个重复10只鸡,A组为饲喂基础日粮和生理盐水注射,B组为饲喂基础日粮和敌草快注射,C组为饲喂添力口500 mg/kg的α-硫辛酸日粮和生理盐水注射,D组为饲喂添加500 mg/kg的α-硫辛酸日粮和敌草快注射,饲养期22天,在第21天每个重复选择3只中等体重的肉鸡按照实验设计分别注射生理盐水和注射敌草快,敌草快的注射浓度为20 mg/kg BW。结果表明：(1)敌草快注射显著降低了肉鸡的体重和免疫器官指数(P<0.05),。日粮中添加α-硫辛酸缓解了敌草快注射诱导的法氏囊指数降低。敌草快注射损害空肠氧化还原状态,降低GSH含量(P<0.05),T-SOD和GSH-Px活性(P<0.05),增加MDA水平和XO活性(P<0.05)。添加α-硫辛酸改善敌草快诱导的氧化还原状态,升高GSH含量(P<0.05),T-SOD和GSH-Px活性(P<0.05),降低MDA水平和XO活性(P<0.05),增加肠道黏膜二胺氧化酶(DAO)活性(P<0.05)。敌草快注射显著增加空肠黏膜中的促炎症细胞因子(IL-1β和TNF-α)(P<0.05),增加IgG和SIgA(P<0.05)。α-硫辛酸的添加降低空肠黏膜中促炎症因子(IL-1β和TNF-a)水平(P<0.05),增加空肠黏膜中IgG和SIgA水平(P<0.05)。敌草快注射对肠道造成明显的损伤,表现在绒毛高度的降低与隐窝深度的增加,显著降低了肠道黏膜中DAO的活性(P<0.05),增加可溶性的细胞间粘附分子(sICAM-1)水平(P<0.05),降低紧密连接蛋白(TJP-1)表达(P<0.05),α-硫辛酸的添加表现出对敌草快诱导的肠道氧化损伤的保护性效果,反映在绒毛高度的增加和隐窝深度的降低,DAO活性的增加,sIC AM-1水平降低和TJP-1表达增加。敌草快注射显著增加核因子-κB (NF-κB)和环氧合酶-2(COX-2)表达,增加髓样分化因子88(MyD88)的表达,以及NF-κB-p65自细胞质向细胞核的转位作用(P<0.05)。α-硫辛酸的添加不仅降低了NF-κB, COX-2和MyD88的表达,同时也减弱了NF-κB-p65自细胞质向细胞核的转位作用(P<0.05)。(2)敌草快注射引起了肝脏氧化还原的失衡：敌草快降低肝脏的抗氧化性能,表现在GSH水平显著下降,GSH-Px活性显著下降,MDA和蛋白羰基水平显著升高(P<0.05),同时敌草快注射显著升高肝脏中一些氧化酶活性(P<0.05)。α-硫辛酸的添加能够改善敌草快注射诱导的肝脏氧化还原失衡,表现为增加肝脏中GSH水平,升高肝脏中T-SOD, GSH-Px活性,降低肝脏中MDA,蛋白羰基水平(P<0.05)。同时对肝脏中氧化酶活性的升高也表现出抑制性效果。敌草快注射引起肝脏线粒体的功能障碍,表现在线粒体结构的受损(线粒体肿胀,内嵴消失),同时也显著降低线粒体膜电位,导致Caspase-3活性增加,20S蛋白酶体活性降低和细胞凋亡指数升高(P<0.05),添加α-硫辛酸缓解了敌草快注射诱导的线粒体功能障碍,表现在维持线粒体形态完整性,升高线粒体膜电位和降低Caspase-3活性,升高20S蛋白酶体活性,减少细胞凋亡指数(P<0.05)。敌草快注射显著增加肝脏Nrf2基因,NQO1基因,UCP基因和BAX基因表达(P<0.05),添加α-硫辛酸增加Nrf2基因,NQO1基因,UCP基因表达,同时显著降低BAX基因表达(P<0.05)。敌草快注射诱导肉鸡肝脏Nrf2蛋白发生转位作用,α-硫辛酸的添加进一步增加了Nrf2蛋白转位作用。4.利用鱼藤酮腹腔连续注射建立肉鸡慢性氧化应激模型,研究日粮中添加α-硫辛酸和慢性氧化应激对机体氧化还原反应的影响。选用肉鸡肠道与肝脏作为研究对象,分别探讨日粮中添加α-硫辛酸对缓解肠道炎症和肝脏保护作用机制。试验采用2×2因子试验设计,即日粮处理(基础日粮或基础日粮中添加500 mg/kg的α-硫辛酸日粮)和氧化应激应激处理(腹腔注射鱼藤酮或葵花油,8 mg/KgBW)。选用400只1日龄AA肉鸡,随机分成4个处理组,每个处理10个重复,每个重复10只鸡,A组为饲喂基础日粮和葵花油注射,B组为饲喂基础日粮和鱼藤酮注射,C组为饲喂添加500mg/kg的a-硫辛酸日粮和葵花油注射,D组为饲喂添加500 mg/kg的α-硫辛酸日粮和鱼藤酮注射,饲养期28天,在第21天起至第27天,每个重复选择3只中等体重的肉鸡按照实验设计分别注射葵花油和注射鱼藤酮,鱼藤酮的注射浓度为8 mg/kg BW。连续注射七天。结果表明：(1)鱼藤酮注射显著降低了肉鸡体重,添加α-硫辛酸可显著缓解肉鸡体重的降低(P<0.05)。鱼藤酮注射显著降低肉鸡胸腺和法氏囊的免疫器官指数(P<0.05),添加α-硫辛酸对鱼藤酮注射诱导的免疫器官指数降低表现出保护性效果,表现在升高胸腺指数上(P<0.05)。鱼藤酮注射显著降低空肠黏膜抗氧化性能,表现在降低GSH含量,T-SOD, GSH-Px活性(P<0.05),同时升高空肠黏膜MDA水平(P<0.05),添加α-硫辛酸对鱼藤酮注射诱导的空肠黏膜抗氧化性能的下降表现出缓解效果,升高空肠黏膜中GSH含量,提高T-SOD和GSH-Px活性,降低MDA水平(P<0.05),。鱼藤酮注射升高空肠黏膜促炎症细胞因子IL-1p和TNF-a水平(P<0.05),升高IgG和SIgA水平(P<0.05)。添加α-硫辛酸减弱鱼藤酮注射诱导的空肠黏膜IL-1p和TNF-a水平增加,增加鱼藤酮注射诱导空肠黏膜IgG和SIgA水平增加(P<0.05)。鱼藤酮注射增加空肠黏膜NF-κB和COX-2基因表达(P<0.05),降低TJP-1基因表达(P<0.05),添加α-硫辛酸降低鱼藤酮注射诱导的空肠黏膜NF-κB和COX-2基因表达增加(P<0.05),。鱼藤酮注射降低空肠黏膜DAO活性(P<0.05),增加空肠黏膜sIC AM-1水平(P<0.05),添加α-硫辛酸增加鱼藤酮注射诱导的空肠黏膜DAO活性降低,降低鱼藤酮注射因为的空肠黏膜sICAM-1水平增加(P<0.05)。鱼藤酮注射增加空肠黏膜NF-KB-p65核转位作用(P<0.05),日粮中添加α-硫辛酸抑制鱼藤酮注射诱导的空肠黏膜NF-κB-p65核转位作用。(2)鱼藤酮的注射显著降低了肝脏的抗氧化性能,表现在肝脏GSH水平、T-SOD和GSH-Px活性(P<0.05), MDA和蛋白羰基水平显著升高(P<0.05),同时鱼藤酮注射显著升高肝脏氧化性能。添加α-硫辛酸改善鱼藤酮注射诱导的肝脏氧化还原失衡,表现在升高肝脏中GSH含量,提高T-SOD的活性,降低MDA和蛋白羰基水平(P<0.05),同时也显著降低鱼藤酮注射诱导的肝脏NOX, XO, MAO和MPO活性升高(P<0.05)。鱼藤酮注射造成肝脏线粒体功能障碍,表现在线粒体形态结构受损和线粒体膜电位显著降低(P<0.05)。同时鱼藤酮显著降低20S蛋白酶体和线粒体复合物I活性(P<0.05),显著升高Caspase-3活性,肝脏BAX基因表达(P<0.05),显著增加肝脏细胞凋亡指数(P<0.05)。添加α-硫辛酸维持了线粒体正常功能,表现在改善受损线粒体形态和显著升高线粒体膜电位(P<0.05),同时升高20S蛋白酶体活性和线粒体复合物I活性,降低Caspase-3活性和肝脏BAX基因表达(P<0.05),降低肝脏细胞凋亡指数(P<0.05)。鱼藤酮注射增加Nrf2和NQO1基因表达(P<0.05),降低UCP基因的表达(P<0.05),添加α-硫辛酸显著增加UCP基因的表达(P<0.05)。鱼藤酮注射显著增加Nrf2蛋白自细胞质向细胞核的转位作用,日粮中添加α-硫辛酸进一步增加Nrf2蛋白转位效果(P<0.05)。综上所述,本文得出如下结论：(1)日粮中添加500-750 mg/kg的α-硫辛酸提高肉鸡的生长性能,但是添加1000mg/kg的α-硫辛酸对肉鸡表现出生长抑制。日粮中α-硫辛酸的添加提高肉鸡的屠宰性能和抗氧化性能,改善肉品质,并能够增加肉在贮藏期间的氧化稳定性。(2)α-硫辛酸的添加尤其是在前期添加,能够增加肉鸡的生长性能,后期添加改善屠宰性能,能够增加抗氧化能力和改善肉品质。α-硫辛酸的阶段添加,同样能够取得全程添加的部分效果。(3) 日粮中添加α-硫辛酸对敌草快腹腔注射诱导的急性氧化应激效果：日粮中添加α-硫辛酸增加了AA肉鸡空肠的抗氧化性能和改善了敌草快诱导的空肠黏膜结构和功能的损伤。a-硫辛酸的这种保护性作用在部分上通过减少促炎症因子的释放和减弱NF-κB信号通路的激活作用来实现。同时,能够升高肝脏的抗氧化性能和抑制氧化性能,维持线粒体功能正常,增加20S蛋白酶体活性来加速氧化蛋白的降解,降低Caspase-3活性和BAX表达,降低敌草快注射诱导肝脏细胞凋亡,增加N62蛋白的转位作用,来维持氧化还原平衡,进而对敌草快注射诱导的氧化应激和肝细胞诱导凋亡起到保护性效果。(4)日粮中添加α-硫辛酸对鱼藤酮腔注射诱导的慢性氧化应激效果：日粮中添加α-硫辛酸降低了鱼藤酮注射诱导的空肠黏膜炎症反应,这种对炎症反应的抑制性效果可能是通过减弱NF-κB信号通路的激活作用和降低促炎症因子的释放来实现的。同时,提高了肝脏的抗氧化性能,降低了肝脏的氧化性能,通过维持正常线粒体功能,增加蛋白酶体活性,升高UCP基因的表达,增加Nrf2蛋白的转位作用而降低Caspase-3的活性和BAX的表达作用,进而降低鱼藤酮注射诱导的细胞凋亡指数,对鱼藤酮诱导的氧化应激起到保护性效果。