替格瑞洛,化学名为（1S,2S,3R,5S）-3-[7-[（1R,2S）-2-（3,4-二氟苯基）环丙基氨基]-5-（丙硫基）-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-3-基]-5-（2-羟乙氧基）环戊烷-1,2-二醇,是由英国阿斯利康公司研发的第一个可逆结合、直接起效、口服给药的小分子抗凝血药物。临床研究结果表明,替格瑞洛具有起效快、个体差异小、出血风险降低等优点,在国内外得到了广泛应用。替格瑞洛的合成路线复杂,且化学结构中包含6个手性中心,导致其成品中可能存在多个有机杂质,包括非异构体杂质和异构体杂质。本课题首先确定了替格瑞洛的合成路线,建立了适合工业大生产的合成工艺,在此基础上分析了成品中可能存在的有机杂质,并建立了有关物质和异构体的高效液相色谱分析方法。本研究为制定更加全面的替格瑞洛质量控制手段提供了重要依据,亦为全面评价替格瑞洛的药品质量,提供理论依据和手段。第一部分替格瑞洛的合成路线和合成工艺确定目的:确定替格瑞洛的工业大生产合成路线和工艺,为杂质研究提供研究实例。方法:查询文献并分析调研,确定大多数厂家采用的合成路线,在合成路线的基础上确定适合大生产的合成工艺。采用该工艺路线合成目标产物,并进行结构确证。结果:采用三个关键中间体即嘧啶环、五元环和三元环作为起始物料,经亲核取代、重氮化关环、亲核取代和脱保护四步合成了中间产物和替格瑞洛。经红外光谱、紫外光谱、质谱和核磁共振检测,确定目标产物的化学结构特征。结论:工艺简便可行,适合放大生产,可制备合格的目标产物,用于杂质分析和验证。第二部分替格瑞洛的有关物质研究1.高效液相色谱法测定替格瑞洛的有关物质目的:建立替格瑞洛各种有关物质检查的高效液相色谱法。方法:以C18柱（型号:YMC-Pack ODS-AQ,150×4.6 mm,3μm）为色谱柱。流动相A:10 mmol/L磷酸二氢钠缓冲液（p H 3.0）;流动相B:乙腈;进行梯度洗脱。检测波长为242 nm。柱温为40℃。流速为1.0m L/min。进样量为10μl。结果:建立的色谱条件下,杂质之间及与替格瑞洛之间能够完全分离,说明方法的专属性较好。各杂质和替格瑞洛分别在所研究浓度范围内线性关系良好,回归系数大于0.999。精密度、重复性、准确度、耐用性、检测限和定量限均符合要求。自制三批替格瑞洛样品各单个杂质含量均小于0.05%,各杂质的和小于0.3%;与原研品杂质谱基本一致。结论:该方法能够控制所有可能存在的非异构体杂质,方法的专属性好、重现性好、灵敏度高、准确度高。适用于替格瑞洛有关物质的质量控制。2.高效液相色谱法测定替格瑞洛的异构体杂质目的:建立替格瑞洛异构体检查的高效液相色谱法。方法:采用以三-（3,5-二甲苯基氨基甲酸酯）直链淀粉键合硅胶为填充剂的手性色谱柱（Chiralpak AD-H,250×4.6 mm,5μm）;以正己烷:无水乙醇:三氟乙酸（85∶15∶0.5）为流动相;检测波长:255 nm;流速:1.0 m L/min;柱温:40℃。结果:建立的色谱条件下,各异构体与替格瑞洛专属性与分离度良好。在相应的线性范围内,线性关系良好。替格瑞洛、Y₁、Y₂、Y₂ˊ、Y₃、Y₃ˊ、Y₄、Y₄ˊ的检测限分别为:0.0032%、0.0057%、0.0030%、0.0034%、0.0033%、0.0034%、0.0032%、0.0053%;定量限分别为:0.013%、0.023%、0.012%、0.014%、0.013%、0.014%、0.013%、0.021%;均能达到检测灵敏度要求。重复性、精密度和准确度均符合要求。色谱条件发生微小变化时对各峰间分离度无明显影响,方法的耐用性良好。结论:该方法可以有效分离替格瑞洛的异构体杂质,方法的专属性好、重现性好、灵敏度高、准确度高。适用于替格瑞洛异构体的含量控制。