论文部分内容阅读
目的通过对结核病患者血浆细胞色素P 450(CYP)1A1和谷胱甘肽S-转移酶(GST)P1基因启动子区Cp G岛甲基化分析,探讨CYP1A1和GSTP1基因甲基化状态改变与抗结核药物所致肝损伤(anti-tuberculosis drug-induced hepatic injury,ADIH)的关系,同时也为ADIH的早期发现及优化治疗方案提供依据。方法1研究对象:采用1:1配比病例对照研究,严格按照病例与对照的纳入及排除标准,选择127例经抗结核治疗6个月内发生肝损伤的患者为病例组,127例未发生肝损伤的患者为对照组。2现场调查:查阅病历获取研究对象的性别、年龄、文化程度及职业等一般情况;烟酒嗜好;结核病严重程度、既往病史及服药史;抗结核化疗方案及用药前后肝功能检查等情况。同时收集患者血液标本于-80℃储存备用。3实验室检测:采用盐析法提取外周血细胞基因组DNA,聚合酶链反应片段长度多态性(RFLP-PCR)法检测多态性;采用血浆游离DNA提取试剂盒提取血浆游离DNA,游离DNA经甲基化修饰试剂盒修饰后采用甲基化特异PCR(MSP)法检测CYP1A1和GSTP1基因启动子区Cp G岛甲基化水平。4统计学分析:研究对象一般危险因素、CYP1A1和GSTP1基因启动子区Cp G岛甲基化状态与ADIH的关系、ADIH影响因素的多因素分析、CYP1A1和GSTP1基因甲基化交互作用的分析均采用条件Logistic回归分析,计算OR值及其95%CI。以上统计分析均双侧检验,规定检验水准α=0.05。结果1一般危险因素的分析:病例组和对照组中婚姻、文化程度、职业、BMI、吸烟、饮酒、结核病类型等因素的分析结果显示,饮酒可能为ADIH发生的危险因素,其他因素在两组分布的差异未见统计学意义。2 CYP1A1和GSTP1甲基化与ADIH的关系:研究结果显示病例组中CYP1A1和GSTP1基因甲基化频率显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。为排除两基因位点多态性的影响,对病例组CYP1A1 MspⅠ和GSTP1 Ile105Val位点多态性与甲基化的相关性进行分析,结果未发现两者之间存在关联,故本研究可排除该基因位点多态性对甲基化的影响。最后采用多因素条件Logistic回归分析调整了饮酒、CYP1A1和GSTP1基因多态性因素的影响,发现CYP1A1和GSTP1基因启动子区Cp G岛高甲基化仍是ADIH发生的危险因素(OR=1.962,2.660)。3 CYP1A1和GSTP1基因甲基化交互作用分析:对CYP1A1和GSTP1基因各甲基化型别之间是否存在交互作用进行了分析,研究结果显示CYP1A1和GSTP1基因均发生甲基化及CYP1A1或GSTP1单一基因甲基化,与均未甲基化相比,差异均具有统计学意义(P<0.05),提示CYP1A1和GSTP1基因甲基化之间存在协同作用,可作为诊断及治疗ADIH的潜在指标。结论1 CYP1A1和GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化与ADIH的发生有关,具有高甲基化特征的患者是发生ADIH的高危人群。2 CYP1A1和GSTP1基因甲基化型别之间存在协同作用,CYP1A1和GSTP1基因均发生甲基化者发生ADIH的危险性显著增加。