目的研究人类巨细胞病毒(HCMV)能否感染体外培养的由人海马神经干细胞(NSCs)分化成的星形胶质细胞(Astrocytes),并观察病毒感染对细胞凋亡的影响,为探讨先天性巨细胞病毒感染致脑发育异常的机制提供理论依据。方法体外分离、培养人海马NSCs,添加血清诱导其定向分化为星形胶质细胞,倒置显微镜下观察细胞的形态学特点并利用间接免疫荧光染色方法通过检测其各自的标志蛋白进行鉴定。然后用HCMV AD169株感染人星形胶质细胞(MOI=1),镜下观察感染后细胞的形态学变化,利用间接免疫荧光技术检测细胞内病毒基因产物-IE蛋白的表达,采用流式细胞术PI染色和细胞涂片Annexin V-FITC/PI染色法检测感染细胞的凋亡情况。同时收集感染细胞的培养液,接种到正常人胚肺二倍体细胞(MRC-5)中,观察有无典型的HCMV致细胞病变出现。结果体外原代培养的人海马NSCs以神经球的形式悬浮生长,绝大多数细胞都表达NSCs的标记物-巢蛋白(nestin),诱导其分化后,细胞高表达星形胶质细胞的标志物—神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。HCMV AD169感染星形胶质细胞7天后,细胞出现肿胀、变大、变圆等典型病变,胞核内检测到HCMV即刻早期基因的表达产物-IE蛋白。流式细胞术PI单染结果显示:MOI=1时,感染组细胞凋亡比例为14.72%±5.78%,明显高于正常对照组7.59%±2.33%,两组比较有统计学意义(t=3.18,P<0.05)。细胞涂片Annexin V-FITC/PI染色结果也显示,感染组细胞凋亡比例高于对照组。收集感染细胞的培养液并接种到HCMV的完全容许性细胞—MRC-5中,一周后细胞也出现上述典型病变,证明HCMV可在星形胶质细胞内增殖、复制并释放到胞外。结论(1)在体外培养的由人NSCs分化成的星形胶质细胞中,HCMV AD169能够建立增殖性感染,该细胞是HCMV的容许性细胞。(2)HCMV感染诱导体外培养的由人NSCs分化成的星形胶质细胞凋亡,这可能与先天性巨细胞病毒感染导致脑发育异常有关。