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中国是世界苹果的起源中心之一,苹果分布范围极为广阔且孕育出众多的种质资源,许多天然苹果属植物群落仍被保留下来。多巴胺是儿茶酚胺的一种,在植物中,多巴胺具有抗氧化、响应植物逆境及与植物激素共同作用调控植物生长发育的功能。而目前苹果中多巴胺的研究相对较少,尤其是多巴胺在苹果中的含量分布及其功能尚不明确。因此,本研究探索了苹果中多巴胺含量的测定方法,并以苹果属资源为试材,比较了苹果属各种质资源中多巴胺的含量,明确了多巴胺在苹果树体中的组织分布,探究了干旱和盐胁迫对多巴胺的影响。同时以‘长富2号’果实为材料,探究了外源多巴胺对苹果果实品质的影响。主要试验结果如下:
1.以苹果品种‘凉香’叶片为试材,基于高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术,探索出了一种苹果多巴胺的分析方法:使用InertSustainAQ-C18色谱柱(150×4.6mm,5μm),柱温40℃,流动相为乙腈和0.1%甲酸水溶液,流速0.7mL·min-1,样品进样量5μL,正离子扫描,离子源为电喷雾(ESI),采用多反应监测(MRM)方式定量分析。结果显示,多巴胺保留时间为2.67min,浓度在0.1-20ng·mL-1内的线性范围良好(R2=0.992),仪器精密度、日间精密度RSD分别为1.024%、5.607%,样品重复性RSD=7.237%,加标回收率大于100%,表明该方法可行,适用于苹果材料多巴胺含量的快速分析。
2.以苹果属资源为试材,测定了其中多巴胺含量。结果表明,多巴胺在苹果属植物中含量极微,多巴胺在叶片中平均含量高于果皮和果肉,在栽培品种中,叶片、果皮、果肉多巴胺含量最高的品种分别是‘Spike’(C28, 7.096 ng·g-1 FW)、‘Otterson’(C42, 10.653 ng·g-1 FW)和‘Cameo’(C1, 1.017 ng·g-1 FW),含量最低的品种分别是‘信浓红’(C19, 1.671 ng·g-1 FW)、‘爵士’(C37, 0.967 ng·g-1 FW)和‘Heisei’(C34, 0.256 ng·g-1 FW)。在野生资源中,叶片、果皮、果肉多巴胺含量最高的种质分别是‘M.sp.2’(W75, 32.722 ng·g-1 FW)、‘富平楸子’(W28, 41.560 ng·g-1 FW)和‘小黄海棠’(W26, 4.583 ng·g-1 FW),含量最低的种质分别是‘红太平’(W62, 0.420 ng·g-1 FW)、‘吉尔吉斯苹果1’(W52, 0.668 ng·g-1 FW)和‘长红’(W103, 0.340 ng·g-1 FW)。在栽培种或野生资源的叶片、果皮、果肉中多巴胺均呈右偏态分布。
3.苹果品种‘皮诺娃’不同组织多巴胺含量由高到低依次是叶芽、花芽、叶片、果皮、茎、花、果肉;‘凉香’叶片和果肉多巴胺含量会随着发育而降低;长期干旱条件下,与对照相比,干旱15d、30d、45d、60d后多巴胺含量分别提高了31.14%、49.07%、40.02%和34.16%。盐胁迫8d和12d后,多巴胺含量分别提高了18.22%和30.07%。
4.外源多巴胺处理‘长富2号’苹果后果实的重量增加、色泽改变;果实中葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、山梨醇含量增加,淀粉含量下降;果实呼吸速率和乙烯释放速率增加,花青苷含量增加,苹果酸含量减少,碳水化合物和花青苷合成相关基因表达量上调。代谢组数据分析表明,多巴胺处理后的果实中部分类黄酮、脂质-甘油磷脂、萜类物质等物质含量显著增加,部分羟基肉桂酰衍生物、生物碱和有机酸等物质含量显著降低。
1.以苹果品种‘凉香’叶片为试材,基于高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)联用技术,探索出了一种苹果多巴胺的分析方法:使用InertSustainAQ-C18色谱柱(150×4.6mm,5μm),柱温40℃,流动相为乙腈和0.1%甲酸水溶液,流速0.7mL·min-1,样品进样量5μL,正离子扫描,离子源为电喷雾(ESI),采用多反应监测(MRM)方式定量分析。结果显示,多巴胺保留时间为2.67min,浓度在0.1-20ng·mL-1内的线性范围良好(R2=0.992),仪器精密度、日间精密度RSD分别为1.024%、5.607%,样品重复性RSD=7.237%,加标回收率大于100%,表明该方法可行,适用于苹果材料多巴胺含量的快速分析。
2.以苹果属资源为试材,测定了其中多巴胺含量。结果表明,多巴胺在苹果属植物中含量极微,多巴胺在叶片中平均含量高于果皮和果肉,在栽培品种中,叶片、果皮、果肉多巴胺含量最高的品种分别是‘Spike’(C28, 7.096 ng·g-1 FW)、‘Otterson’(C42, 10.653 ng·g-1 FW)和‘Cameo’(C1, 1.017 ng·g-1 FW),含量最低的品种分别是‘信浓红’(C19, 1.671 ng·g-1 FW)、‘爵士’(C37, 0.967 ng·g-1 FW)和‘Heisei’(C34, 0.256 ng·g-1 FW)。在野生资源中,叶片、果皮、果肉多巴胺含量最高的种质分别是‘M.sp.2’(W75, 32.722 ng·g-1 FW)、‘富平楸子’(W28, 41.560 ng·g-1 FW)和‘小黄海棠’(W26, 4.583 ng·g-1 FW),含量最低的种质分别是‘红太平’(W62, 0.420 ng·g-1 FW)、‘吉尔吉斯苹果1’(W52, 0.668 ng·g-1 FW)和‘长红’(W103, 0.340 ng·g-1 FW)。在栽培种或野生资源的叶片、果皮、果肉中多巴胺均呈右偏态分布。
3.苹果品种‘皮诺娃’不同组织多巴胺含量由高到低依次是叶芽、花芽、叶片、果皮、茎、花、果肉;‘凉香’叶片和果肉多巴胺含量会随着发育而降低;长期干旱条件下,与对照相比,干旱15d、30d、45d、60d后多巴胺含量分别提高了31.14%、49.07%、40.02%和34.16%。盐胁迫8d和12d后,多巴胺含量分别提高了18.22%和30.07%。
4.外源多巴胺处理‘长富2号’苹果后果实的重量增加、色泽改变;果实中葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、山梨醇含量增加,淀粉含量下降;果实呼吸速率和乙烯释放速率增加,花青苷含量增加,苹果酸含量减少,碳水化合物和花青苷合成相关基因表达量上调。代谢组数据分析表明,多巴胺处理后的果实中部分类黄酮、脂质-甘油磷脂、萜类物质等物质含量显著增加,部分羟基肉桂酰衍生物、生物碱和有机酸等物质含量显著降低。