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成花是开花植物生命周期中一个重要的生理转变过程,MADS-box基因在高等植物成花时间和花器官形态建成过程中发挥着至关重要的作用。MADS-box转录因子是MADS基因功能的直接行使者,通常以同源或异源二聚体形式发挥作用。本实验基于山核桃雌花芽转录组454测序,克隆得到了几个CcMADS基因的开放阅读框,并进行了初步研究,得到以下结论。1.多序列比对和进化树分析表明,得到的CcMADS属于典型的植物MADS-typeⅡ,分别命名为CcAP1(AHI85952), CcSVP (AHI85951), CcSOC1(AHI85950), CcTM;这些MADS转录因子具有明确的MIKC分区,其中有高度保守的M区和相对保守的K区。2.CcTM不同组织的实时定量PCR (qRT-PCR)实验显示,CcTM在根、茎中未检测到表达,在叶、花芽中大量表达,尤其是花芽中高出7-10倍,暗示其可能在成花过程中发挥作用。3.酵母双杂交(H2Y)实验表明,山核桃AP1和SVP、AP1和FLC1、AP1和FLC2、SVP和FLC1、FLC1和FLC2组合蛋白两两相互作用,且CcAP1、CcSVP、CcFLC1、CcFLC2存在自我相互作用。CcSOC1表现一定程度的“惰性”,不与包括自己在内任何CcMADSs相互作用。4.CcSOC1结构域的H2Y实验表明,M区的存在似乎阻碍了CcSOC1二聚化的形成,K区的存在表明了CcSOC1仍然有形成同源或异源二聚体的潜力。5.杂交酵母的蛋白免疫印迹(WB)检测,表明目的蛋白成功在酵母中表达,且表达量足以支持其表现应有的阳性表型。6.采用WB对山核桃CcSVP不同组织(雌雄花芽)不同时期的表达水平进行检测,发现山核桃CcSVP在不同发育时期表达水平不同,大体呈现峰形变化。7.提取雄花芽中活性CcSVP,经Native-PAGE后进行WB,发现花芽中CcSVP以多种不同聚合程度的多聚体形式存在。