PEG诱导的雨生红球藻细胞融合与变异株的筛选

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenfurongyalan
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)是一种生活在淡水里的单细胞绿藻,该藻由于能大量积累一种经济价值很高的红色素——虾青素(astaxanthin),因而成为继螺旋藻之后的另一种高经济价值的微藻。虾青素是良好的着色剂,并具有超强的抗氧化、捕获自由基、抗癌变,抗紫外线辐射、增强免疫等功能,在饲料、食品和化妆品等领域有着广泛的市场需求。目前国内外虾青素的产量远远达不到市场的需求,国内外都在大力推动规模化养殖雨生红球藻,实现虾青素的商业化生产。但规模化养殖雨生红球藻仍存在许多问题,如养殖过程中生长较慢、产量较低,同时易被其他微藻、原生动物、细菌等污染。因此选育高产的藻种是解决上述问题的重要关键。
  本研究选用不同体积浓度的PEG(聚乙二醇)作为细胞融合诱变剂,在不同Ca2+浓度、二甲基亚砜浓度、处理时间、细胞接触方式等因素作用下,诱导雨生红球藻细胞发生融合杂交变异,采用正交试验设计,测定不同PEG体积分数、Ca2+浓度、二甲基亚砜浓度、反应时间及雨生红球藻细胞间的接触方式对雨生红球藻细胞融合率的影响。
  试验结果显示采用摇晃摔打法的细胞接触放式时,55%PEG的浓度、25mg/1000ml的Ca2+浓度、10%的二甲基亚砜浓度、25℃下处理10min可以取得较高的雨生红球藻细胞融合率,即A482C3D2是最佳处理因素组合。在采用摇晃摔打加离心重力挤压的细胞接触方式时,50%PEG的浓度、25mg/10000ml的Ca2+浓度、5%的二甲基亚砜浓度、25℃下处理10min可以取得较高的雨生红球藻细胞融合率,即A离3B离2C离2D离2是最佳处理因素组合。
  通过固体培养基分离筛选培养法(简称固筛法)和离心重力分离筛选培养法(简称重筛法),培养一段时间后,在40倍显微镜下观察雨生红球藻细胞团的分裂数目,并测量其雨生红球藻细胞的直径,把细胞团中细胞数大于8、细胞直径大于25um的细胞团筛选出来,结果筛选出20株细胞肥大且分裂速度快的雨生红球藻细胞株系。此结果表明离心重力分离结合固体平板培养基培养,在40倍显微镜下操作,可以快速筛选出细胞肥大、分裂生长速度快的雨生红球藻细胞株系。
  对筛选得到的20株细胞肥大、分裂生长速度快的雨生红球藻细胞株系进行MVA液体培养基培养,先在2000Lux低光照条件下培养测定其生长速率,再在5000-6000Lux中等强度光照条件下培养,测定各选择雨生红球藻株系的虾青素积累量和单位培养液体积内的虾青素产量,综合生长速率、虾青素含量与产量等各项指标,最后筛选出P5、P13、P20等雨生球藻高产株系,生长速率分别比原始出发株提高30.23%、19.86%、19.16%,虾青素产量分别比原始藻株提高72.12%,73.96%,63.89%。
  将经过系列筛选得到的P5、P13、P20等雨生红球藻高产株系培养四、五代后详细测定其生长速率和虾青素含量,各筛选株的各项特征基本稳定,每个世代的细胞密度及虾青素产量基本比较稳定遗传,表明筛选到的高产变异藻株遗传性能稳定。
其他文献
假俭草(Eremochloaophiuroides),是中国特有的草坪草,其植株低矮,具强壮的匍匐茎,蔓延力强而迅速,成坪速度快,侵占性强,抗杂草能力强,对瘠薄土壤的适应性好,不易感染病虫害。假俭草是一种非常理想的低水平养护管理的草种,特别适合用于公路养护、水土保持及一般的绿地建植。本文以宁镇丘陵地区的8份野生假俭草为试验材料,系统地对其生长特性、越冬性、抗寒性及种子生产特性进行了研究,同时对其草
学位
SYCP3蛋白是一种DNA结合蛋白,定位于联会复合体(SC)的侧成分(LEs),在同源染色体的联会中起重要作用,是雄性精子发生过程中减数分裂步骤所必需的蛋白。SYCP3基因缺失或低表达所引起的精子发生障碍表型与实验室前期研究发现的犏牛(黄牛与牦牛种间杂交后代)雄性不育、减数分裂阻滞的表型是一致的。为进一步探究SYCP3基因的功能及其与犏牛雄性不育的关系,本文采用PCR扩增和克隆测序结束获得黄牛和牦
学位

为了开发新型表达序列标签微卫星(EST-SSR)标记,筛选获得多态性丰富同时与性状连锁的标记位点,并以之为基础建立动物基因聚合分析预测方法,选出适于多基因聚合的最佳基因型类群,本研究收集下载绵羊特定组织表达序列标签设计开发新型EST-SSR标记,并结合关联性分析结果获得与性状连锁的EST-SSR标记位点,通过电子PCR技术将之定位于特定染色体上,同时完成原始EST的功能注释,明确标记位点可能的生物
学位
Myostatin(MSTN)是肌肉生长抑制素,又称GDF-8,属于TGF-p超家族成员。该基因已被证明是是肌肉生长的负调控因子。自发突变或遗传操作(敲除或下调)造成的MSTN失活,已经被报道可以增加许多种动物的骨骼肌数量。RNA干扰(RNAi)是dsRNA介导的一种序列特异性的转录后基因沉默(PTGs)现象。RNAi技术的出现为研究基因功能提供了一种快速而有效的基因敲除方法。病毒载体已经被开发用
学位
为了探讨了低蛋白平衡日粮断奶仔猪生产性能、圈舍环境以及消化道区系的影响。将平均体重为10.2kg的二元杂交(长×大)断奶仔猪241头,随机分为两个组,每组4个重复,分别饲喂粗蛋白含量分别为19.52%(对照组)和18.48%(低蛋白平衡日粮组)的日粮,试验预饲期为5天,试验期为23天(30-53日龄)。试验中期连续三天,每天2次(早上5:00和下午14:00)检测猪圈内采食区、躺卧区、排粪区的氨气
学位
干扰素调节因子1(Interferon regulatory factor-l,IRF-1),是干扰素调节因子家族成员之一,可以激活I类干扰素基因的转录,被证明有调节细胞增殖、凋亡、免疫等多方面的生物学功能。牛病毒性腹泻病毒(BVDV)为单链RNA病毒,主要引起牛病毒性腹泻,并且可感染多种偶蹄类动物;牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)为双链DNA病毒,主要感染牛,引起牛呼吸道疾病、结膜病、生殖道疾病
学位

本试验以箭筈豌豆、多年生黑麦草和苇状羊茅为青贮原料,采用混合青贮和添加剂的方式,筛选出适宜的混合比例,并研究添加剂对混合青贮发酵品质的影响。添加剂分别是糖蜜(M:3%、4%、5%FW)、酒糟(WBG: 10%、20%、30% FW)及3%糖蜜+10%酒糟。青贮饲料的取样时间点设置为7、14、30和60天,不同时间点和不同处理设三个重复。  试验一:不同混合比例对箭筈豌豆与多年生黑麦草混合青贮发酵品
学位
Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)作为一种重要的模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRRs),能够特异性识别病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattems,PAMPs),激发动物天然免疫和获得性免疫的早期免疫反应。TLR4(Toll-like receptor 4)是TLRs受体
学位
苏丹草叶斑病是近年来在我国南方苏丹草种植区普遍发生的一种病害。本文系统的报道了苏丹草叶斑病的病状、病原物分离与鉴定、生物学特性、产孢条件及侵染条件等方面,为诊断和有效的防治该病提供了理论支持。  1.苏丹草叶斑病病原菌的分离与鉴定  苏丹草叶斑病病主要危害叶片,叶部发病初期呈现水浸状小斑点,后褪绿,逐渐扩展为近长条形紫红色色病斑,后期病斑表面产生霉层严重时病斑汇集成片,布满整个叶片,导致叶片黄化坏
骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein,BMP15)属于转化生长因子β(TGFβ)超家族成员,定位于X染色体,由卵母细胞特异表达,以旁分泌方式调节颗粒细胞功能,并参与调节印泡生长的微环境,对早期卵巢卵泡的生长发育起着重要的调控作用。本试验以BMP15基因为候选基因,采用PCR-SSCP技术,对湖羊和中国美利奴共348个个体进行多态性检测,分析绵羊BMP15基因第一
学位